Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
Forum robot Постоянный участник на сервере в Москве |
|
yaden Постоянный участник |
|
Mac-1 Постоянный участник оттуда |
Коллоидная окраска хорошо работает только на тонких и сверхтонких гелях (0.5 mm и тоньше, типа PhastGel), для 0.75-1 мм лучше применять краску такого состава: 5 мг Кумасси R-250 10 мг Кумасси G-250 10 мг Amido black ------------------ 100 ml 10% Уксусной кислоты Гель разбухает при окраске, что обеспечивает лучшую диффузию краски внутрь, при отмывке в 5% уксусной/20% метанол он возвращается к обычному размеру. |
гость: г IP-штамп: fra6xdMWXgbHc гость |
Обычно использовал коллоидное Кум.после окрашивания стандартным способом с R-250 для усиления окраски слабых полос, но красить надо сутки, помогало. |
yaden Постоянный участник |
G.Candiano et al. Blue silver: A very sensitive colloidal Coomassie G-250 staining for proteome analysis. Electrophoresis 2004, 25, 1327–1333. http://www3.interscience.wiley.com/cgi-bin...565269/ABSTRACT Делаю как в статье, только метанол заменяю на этанол - работает хорошо. Но полгода не хранится... проверено. |
Гость IP-штамп: frftLGqhpFF.A гость |
Пологаю, для него подойдет раствор любого коллоидного кумасси - я делал это с био-радовским 161-0786. Итак: 1. Поместить гель в 100мл ультра-чистой воды и греть в микроволновке при 950-1100Вт ----- 1 минута. 2. Покачать гель на орбитальном шейкере и слить воду ----- 1 минута. 3. Дважды повторить этапы 1 и 2 ----- каждого по 1 минуте. 4. Добавить 20-30мл коллоидного кумасси и погреть в микроволновке при 950-1100Вт ----- 45-60 секунд. 5. Покачать на орбитальном шейкере. Слить краску ----- 5-10 минут. 6. Мыть гель покачиванием в 100мл ультрачистой воды ----- 10 минут. 7. Влить в воду 20мл 20%NaCl и качать ----- 5-10 минут. (8. При желании повторить этап 6, чтобы убрать фон ----- 1 час). Еще отсебятина: жидкости буквально кипят, но 3%ПААГ или градиентный 3-8%ПААГ остаются целыми, чуствительность неплохая - я красил после трансфера/20 часов и, к своему удивлению, что не все перенеслось. Надеюсь, это те 5нг, про которые пасали на фирме. А фон белый-белый. |
plotter Постоянный участник Стыдно признаваться о том, где живу... |
Сообщение было отредактировано plotter - 11.12.2008 19:12 |
plotter Постоянный участник Стыдно признаваться о том, где живу... |
|
plotter Постоянный участник Стыдно признаваться о том, где живу... |
|
guest: ммм IP-штамп: frzbfAE0vSQrM гость |
Я другим протоколом красил там ТХУК и сульфата и фосфорки нет. --под сантиметровым слоем обычного дистиллята. Это зря лучше все же в уксусе низкомолекулярные белочки размываются в водице, а то и совсем из геля выходють. -Написано, что после отмывки нельзя долго хранить. Может коллоидный кумаси легко отваливается от геля, не знаю. |
plotter Постоянный участник Стыдно признаваться о том, где живу... |
Это зря лучше все же в уксусе низкомолекулярные белочки размываются в водице, а то и совсем из геля выходють ~12.5kDa. Сидят как вкопанные.
|
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |