Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
Forum robot Постоянный участник на сервере в Москве |
Определение концентрации белка, допустимые количества примесей. Быстрый метод проявления в микроволновой печи. Раздел Методы сайта molbiol.ru. |
Profi |
|
Николай Полянский |
Reagents 1. Reagent A: 8 gm sodium carbonate monohydrate, 1.6 gm sodium tartrate, brought to 100 ml with distilled water. Adjust the pH to 11.25 with 10 M NaOH. 2. Reagent B: 4 gm BCA in 100 ml distilled water. 3. Reagent C: 0.4 gm cupric sulfate (5 x hydrated) in 10 ml water. 4. Working solution: Mix 1 volume reagent C with 25 volumes reagent B, then add 26 volumes reagent A to the C/B mixture. Assay 1. Prepare samples containing 0.2 to 50 micrograms protein in 500 microliters. 2. Add 500 microliters working solution to each 500 microliters sample and mix. Incubate 60 min. at 60 degrees C. 3. Cool the samples and read at 562 nm. Analysis Prepare a standard curve of absorbance versus micrograms protein (or vice versa), and determine amounts from the curve. Determine concentrations of original samples from the amount protein, volume/sample, and dilution factor, if any. If you are unfamiliar with how to obtain a protein concentration for a diluted sample from a standard curve, see how to prepare and use a protein standard curve. Reference Stoscheck, CM. Quantitation of Protein. Methods in Enzymology 182: 50-69 (1990). С альфа-кристаллином калибровка в интервале 0,5 - 20 мкг в пробе давала нормальную линейную зависимость, а когда я пытался постооить с БСА "Sigma", то получалось сплошное безобразие. Николай Полянский |
Гость IP-штамп: frw3GfipDY0Lk гость |
|
Kaabir IP-штамп: frfb/UfMm2zMM гость |
|
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |