Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* PAAG электрофорез белков -- comments to a permanent page of the site --
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Тема связана с: SDS PAAG
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! Forum robot
Постоянный участник
на сервере в Москве



 прочитанное сообщение 12.12.2005 13:24     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Комментарии к постоянной странице сайта: PAAG электрофорез белков

Приготовление полиакриламидного геля и электрофорез белков. Выбор % разрешающего геля. Подготовка форезного аппарата. Форез. Хранение гелей.
Участник оффлайн! Fibrinolysis
Участник
Земля



 прочитанное сообщение 12.12.2005 13:24     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

Хотелось бы уточнить для тех кто делает в первый раз, что pH пятикратного TGB доводить до 8.3 не нужно!
Участник оффлайн! Fibrinolysis
Участник
Земля



 прочитанное сообщение 12.12.2005 15:10     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

В классической работе Лэмли (Laemli,U.K., Nature,227, 680 (1970))
1x TGB = 25 mM Tris, 192 mM glycine, 0,1% SDS pH=8,3
Участник оффлайн! 0xy
Участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  12.12.2005 15:22     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

Laemmli, U.K.
atv
IP-штамп: frYbYLePaIpgo
гость



 прочитанное сообщение 13.12.2005 03:26     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

А вот вразумите всё-таки, можно ли сделать готовый раствор для геля (т.е. всё кроме APS+TEMED) и его хранить (в холодильнике, например)? И как долго?
Участник оффлайн! Batareykin
Постоянный участник
пожизненный ЭЦИХ с гвоздями



 прочитанное сообщение 13.12.2005 08:23     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

(atv @ 13.12.2005 00:26)
Ссылка на исходное сообщение  А вот вразумите всё-таки, можно ли сделать готовый раствор для геля (т.е. всё кроме APS+TEMED) и его хранить (в холодильнике, например)? И как долго?


конечно, можно.
Я для своих целей и 15 % разделяющего, и концентрирующий так держу в холодильнике.

только долго хранить его не стоит (более 1 года smile.gif ) - протухаеть...
Участник оффлайн! Batareykin
Постоянный участник
пожизненный ЭЦИХ с гвоздями



 прочитанное сообщение 13.12.2005 08:24     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

(Forum_robot @ 12.12.2005 10:24)
Ссылка на исходное сообщение  <strong><font color='#800000'>Комментарии к постоянной странице сайта</font>: PAAG электрофорез белков</strong>

Приготовление полиакриламидного геля и электрофорез белков. Выбор % разрешающего геля. Подготовка форезного аппарата. Форез. Хранение гелей.


бедный робот...
_a_jadan_
IP-штамп: frftLGqhpFF.A
гость



 прочитанное сообщение 11.01.2006 20:00     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

к п 5,8 дегазировать можно как вакуумом, так и продувкой азотом, или инертными газами (гелий), главное избавиться от кислорода, причем продувка быстрее и эффективнее, пузырек с раствором закрывается резиновой пробкой с двумя иголками, конец одной на дно, другой под крышкой, к длинной игле камеру (от мяча, шарик) с азотом (или балон, через редуктор) поток - чтоб еле булькало. (несколько минут и готово) не нужен ни насос, ни мешалка.
_Pedro77_
IP-штамп: frftLGqhpFF.A
гость



 прочитанное сообщение 11.01.2006 21:10     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

Чтоб избежать размывки трэков при внесении проб с высоким содержанием соли либо с ПАВ, полезно с двух боков в лунки нанести чистый буфер для образцов (который добавляли в пробы перед кипячением). Часто это помогает получить более-менее не размытую картинку.

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): Feodor
_Dascha_
IP-штамп: frftLGqhpFF.A
гость



 прочитанное сообщение 11.01.2006 21:37     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование

Собственно, готовые SDS-гели можно хранить и при комнатной температуре, предварительно поместив во что-то влажное, например, фильтровальную бумагу, и не давать им высыхать. ДТТ мы храним на -20 сколько угодно, и он не портится.
Например в Германии 10% персульфат аммония принято в виде раствора хранить в морозильнике, хотя принято делать его всегда свежим. Но, видимо, немецкая практика оправдана, потому что гели получаются, сама их заливала.
Гость
IP-штамп: frftLGqhpFF.A
гость



 прочитанное сообщение 11.01.2006 21:47     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #11 множественное цитирование

Уважаемые есть еще такой момент что уж еще раз вспоминая Остермана хочу отметить что ПСА лучше добавлять в растворгеля в последнюю очередь.А с рибофлавином такая штука , он конечно хорош, но летом в холодной лаборатории без света полимеризация занимает гораздо большее время с ним чем с ПСА. И еще просьба вы пишете про выбор концентрации гелей относительно массы белка. Будет лучше если вы еще напишете список этих самых белков с их массами. начинающим будет удобней.
Участник оффлайн! comp3v
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 15.01.2006 03:01     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #12 множественное цитирование

хм... а мы вот 10% APS и вовсе на +4 храним, и довольно долго - работает без проблем.
Участник оффлайн! Николай Полянский




 прочитанное сообщение 20.02.2006 14:49     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #13 множественное цитирование

Коллеги, хотелось бы знать, м.б. кто-нибудь имел дело с разделением водонерастворимых белков. Проблема такая - образец белков, растворенных в мочевине и тиомочевине и после соответственно кипячения в синем буфере и разделения дает очень расплывчатую картину. Много хуже картины водорастворимых белков. В сам буфер мочевину не добавляю.

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): mdulya
ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 20.02.2006 15:15     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #14 множественное цитирование

2 Николай Полянский.

Общая рекомендация такая. Мочевину и ее тио подругу из раствора удалить начисто(например диализом), белки конечно в осадок выпадут, но это не должно вас пугать. Сей осадок надо собрать и как следует покипятить в "синем буфере", белки конечно полностью не растворятся, но львиная их доля растворится, пробу надо отцентрифуговать и отобрать супер его и использовать как пробу.

PS мочевина мешает связыванию SDS с белком, и когда белки выходят из мочевины в SDS то часть из них выпадает в осадок(особенно, если белки сильно нерастворимые и в высокой концентрации) и получаются хвосты.
Участник оффлайн! Garry




 прочитанное сообщение 20.02.2006 16:16     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #15 множественное цитирование

Полянскому Н. > Мы занимаемся анализом гибридности семян (кукурузы, подсолнечника, ячменя ....). Короче почти все объекты - проламины, за исключением гелиантина подсолнечника. Так вот, если SDS электрофорез не является для Вас критичным, то мы проводим электрофорез в среде таких детергентов как мочевина. Она входит и в состав буфера для растворения и в состав геля. Результаты получаются очень неплохие. Если нужно подробнее, то пишите мне на мейл.

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): mila-belchik
Гость
IP-штамп: frTlWdNmzlEpc
гость



 прочитанное сообщение 22.02.2006 11:02     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #16 множественное цитирование

Спасибо. Очевидно, попробую оба варианта.
Guest
IP-штамп: fr3PpYUagJAXg
гость



 прочитанное сообщение 22.02.2006 12:33     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #17 множественное цитирование

To: Garry
Мочевина - НЕ ДЕТЕРГЕНТ (т.е. не является "омыляющим" веществом, способным образовывать мицеллы в растворе), а ХАОТРОПНЫЙ АГЕНТ.
Гость
IP-штамп: frW6PQ8r6IMNg
гость



 прочитанное сообщение 01.06.2006 12:49     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #18 множественное цитирование

Уважаемые коллеги! Поделитесь опытом извлечения белка из ПААГ блока или его фрагментов так, чтобы можно было посчитать С14-радиоактивность в полосках белков (разумеется, они будут вырезаны)

Заранее благодарим.
С наилучшими пожеланиями,
snz@post.nsu.ru
Участник оффлайн! comp3v
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 03.06.2006 18:03     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #19 множественное цитирование

а вот такой вопрос возник. У меня есть лизаты в гуанидиновом буфере (6M GuaCl, для последующей очистки на Ni-резине), и в идеале хотелось бы аликвоту оттуда брать на вестерн. Брать "прямо так" - однозначно не получается (при миграции получается жуть, тем более что наносить приходится довольно много, поскольку белок сильно разбавлен). Но я вот тут почитал, что некоторые мочевину добавляют прямо при приготовлении геля, и подумал - а нельзя ли такое же и с гуанидином сделать? то бишь, добавить его в сам гель... или это совсем дурная идея?
Участник оффлайн! Tom1
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 04.06.2006 02:57     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #20 множественное цитирование

проще взять аликвоту и высадить тху.....
Участник оффлайн! bukach
Постоянный участник
Geneva, Switzerland



 прочитанное сообщение 05.06.2006 18:40     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  ICQ
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #21 множественное цитирование

(comp3v @ 03.06.2006 19:03)
Ссылка на исходное сообщение  а вот такой вопрос возник. У меня есть лизаты в гуанидиновом буфере (6M GuaCl, для последующей очистки на Ni-резине), и в идеале хотелось бы аликвоту оттуда брать на вестерн. Брать "прямо так" - однозначно не получается (при миграции получается жуть, тем более что наносить приходится довольно много, поскольку белок сильно разбавлен). Но я вот тут почитал, что некоторые мочевину добавляют прямо при приготовлении геля, и подумал - а нельзя ли такое же и с гуанидином сделать? то бишь, добавить его в сам гель... или это совсем дурная идея?


yes.gif совсем. гуанидин, в отличие от мочевины, заряжен.
Участник оффлайн! comp3v
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 05.06.2006 18:50     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #22 множественное цитирование

ну да, я просто как-то раз наткнулся на протокол, где его добавляли - в небольших количествах, но гнать потом приходилось на очень маленьком токе.

А вот тогда скажите лучше - что именно выпадает в осадок при добавлении Laemmli к пробе, содержащей GuaCl? Я так понял, что SDS, но в комплексе с чем? если с гуанидин-анионом, то нельзя ли таким макаром высадить весь гуанидин из пробы, или наш белок при этом тоже весь в осадок уйдёт? (но если брать избыток SDS, то может, и прокатит?...)
Участник оффлайн! comp3v
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 05.06.2006 18:55     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #23 множественное цитирование

да, и ещё, вдогонку - а когда в гель добавляют мочевину - нельзя ли таким образом "компенсировать" гуанидин в пробе (чтобы миграция шла нормально)?
ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 06.06.2006 15:45     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #24 множественное цитирование

---Я так понял, что SDS, но в комплексе с чем? если с гуанидин-анионом, то нельзя ли таким макаром высадить весь гуанидин из пробы, или наш белок при этом тоже весь в осадок уйдёт?

Если это так то можно, но тогда существует опасность, что и часть белка попадетв этот осадок.

---да, и ещё, вдогонку - а когда в гель добавляют мочевину - нельзя ли таким образом "компенсировать" гуанидин в пробе (чтобы миграция шла нормально)?

Подумайте хорошенько и поймет, что нельзя.

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): bukach
atv
IP-штамп: fr4RLg76Oofjo
гость



 прочитанное сообщение 16.07.2006 13:45     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #25 множественное цитирование

расскажите, пожалуйста, для чего при форезе часто берут вместо второго стекла белую пластину (как она, кстати, правильно называется? алюминий-оксидная?) чем это лучше?
и можно ли этот материал где-нибудь самому достать или купить подешевле? а то покупать фармациевский комплект очень уж долго и дорого...
Участник оффлайн! Utcn
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 17.07.2006 12:14     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #26 множественное цитирование

Это керамика с высокой теплопроводностью - для лучшего охлаждения геля. ИМХО, на фиг не нужна...
Участник оффлайн! Alder
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 18.07.2006 20:03     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #27 множественное цитирование

"а вот такой вопрос возник. У меня есть лизаты в гуанидиновом буфере (6M GuaCl, для последующей очистки на Ni-резине), и в идеале хотелось бы аликвоту оттуда брать на вестерн. Брать "прямо так" - однозначно не получается (при миграции получается жуть, тем более что наносить приходится довольно много, поскольку белок сильно разбавлен). Но я вот тут почитал, что некоторые мочевину добавляют прямо при приготовлении геля, и подумал - а нельзя ли такое же и с гуанидином сделать? то бишь, добавить его в сам гель... или это совсем дурная идея?"

если концентрации белка позволяют, то развести образец раз в 10 и можно гнать форез, полосы чуть-чуть будут размыты.
Иначе - метанол-хлороформом высадить, минут 5-20 дополнительных в зависимости от кол-ва проб

Сообщение было отредактировано Alder - 18.07.2006 20:03
Участник оффлайн! Tom1
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 18.07.2006 22:03     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #28 множественное цитирование

Алдер имхо тупо и храбро тху - все.....
Гость
IP-штамп: frdk4fFh7od4A
гость



 прочитанное сообщение 16.08.2006 08:22     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #29 множественное цитирование

Такой вопрос: При кипячении образца в синем буфере образуется углеводная пробка. Как от нее избавится? Говорят, что надо добавить А-амилазу, тогда в какой концентрации, и можно ли ее чем либо заменить?
Гость
IP-штамп: frqXZNuewKQBA
гость



 прочитанное сообщение 26.09.2006 17:45     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #30 множественное цитирование

Ребята, помогите плиз
столкнулась с проблемой: покупаю бисакриламид, мне предлагают диакриламид. есть ли качественная разница (в количестве сшивок и т.д.) между бисакриламидом и диакриламидом?
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 27.09.2006 19:05     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #31 множественное цитирование

диакриламид очень сомнительное название. Возможно это димер акриламида, так этот супчик вообще сшивок давать не будет. А то что бисакриламидный аналог без метиленового мостика по идее должен содержать в своем названии слово гидразид и по большому счету довольно экзотичное соединение по сравнению с бисом.
Гость
IP-штамп: frTlWdNmzlEpc
гость



 прочитанное сообщение 17.10.2006 14:05     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #32 множественное цитирование

Уважаемые коллеги, нет ли у кого-нибудь опыта "негативного окрашивания" геля с помощью ацетата цинка. Попробовал по описанной методике (Matsui et al.), но применbл не деионизованную воду, а обычный дистиллят. Успеха не имел. Если есть некоторые "хитрости", плз, поподробнее.
Николай Полянский
Гость
IP-штамп: frNYJZecF5GO2
гость



 прочитанное сообщение 14.12.2006 13:07     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #33 множественное цитирование

необходимо выделить белок из мышечной ткани рыбы, подвергшейся тепловой обработке, для дальнейшего проведения электрофореза на автоматической системе FastSistem, какой экстрагирующий раствор лучше применить
Гость
IP-штамп: frNYJZecF5GO2
гость



 прочитанное сообщение 14.12.2006 13:07     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #34 множественное цитирование

необходимо выделить белок из мышечной ткани рыбы, подвергшейся тепловой обработке, для дальнейшего проведения электрофореза на автоматической системе FastSistem, какой экстрагирующий раствор лучше применить
Участник оффлайн! Pavel2
Участник



 прочитанное сообщение 14.12.2006 18:43     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #35 множественное цитирование

(Fibrinolysis @ 12.12.2005 12:10)
Ссылка на исходное сообщение  В классической работе Лэмли (Laemli,U.K., Nature,227, 680 (1970))
1x TGB = 25 mM Tris, 192 mM glycine, 0,1% SDS pH=8,3

Помогите разобраться. Мне нужно приготовить 1 л TGB готового к применению (я так понимаю 1xTGB). Для этого я беру Tris-base 15.1g + Glycine 94g + 50 ml SDS (http://molbiol.ru/protocol/17_01.html#s1)
А как приготовить 50 ml SDS он в сухом виде. В стоке (кстати что это такое?) SDS 10%, значит нужно на 1 литр взять 100 г SDS?
Объясните пожалуйста поподробней, скажу сразу я не биохимик. confused.gif
Участник оффлайн! Tom1
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 14.12.2006 18:50     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #36 множественное цитирование

СДС сухой сыпать в буфер себя не любить....
Делаите 10% сток т.е. на 100мл воды 10г СДС
Соответственно сначала растворяите трис и глицин примерно в 900мл воды потом добалвяите 10% сдс и доводите до литра водой....
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 14.12.2006 18:59     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #37 множественное цитирование

---СДС сухой сыпать в буфер себя не любить....

Хе-Хе в электродный я так не делаю не сыплю, а вот во второй раствор для плазмид частенько сыплю сухого. Бо его там в 10 раз больше надо.

--делаите 10% сток т.е. на 100мл воды 10г СДС

Истино так. И кстати я его из пипетки прямо в минусовую камеру, для экономии. В два раза меньше расход. smile.gif
Участник оффлайн! Pavel2
Участник



 прочитанное сообщение 15.12.2006 00:54     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #38 множественное цитирование

Спасибо за Ваши ответы.
Хотел еще узнать, я использую midi-камеру для электрофореза, мне 500 ml TGB хватит в качестве рабочего объема? И еще, я все правильно делаю для приготовления 1L TGB?
Tris-base 15.1g + Glycine 94g растворяю в 900 ml Н2О, добавляю 50 ml SDS (5g SDS+50ml Н2О) и довожу до 1L Н2О
Глицина не слишком много, половина упаковки приходится высыпать?

Сообщение было отредактировано Pavel2 - 15.12.2006 00:58
Guest
IP-штамп: fra6xdMWXgbHc
гость



 прочитанное сообщение 15.12.2006 10:48     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #39 множественное цитирование

я делаю трис-глициновый буфер 10х: 144г глицина, 10г SDS, 30г Tris и до 1л воды. а потом уже разводится до 1х.
Участник оффлайн! Pavel2
Участник



 прочитанное сообщение 15.12.2006 11:22     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #40 множественное цитирование

(Guest @ 15.12.2006 07:48)
Ссылка на исходное сообщение  я делаю трис-глициновый буфер 10х: 144г глицина, 10г SDS, 30г Tris и до 1л воды. а потом уже разводится до 1х.

До 1х это допустим 100 мл 10хSDS+1000 мл воды?
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 15.12.2006 14:35     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #41 множественное цитирование

И еще, я все правильно делаю для приготовления 1L TGB?
Tris-base 15.1g + Glycine 94g растворяю в 900 ml Н2О!

НЕТ НЕ ПРАВИЛЬНО!!!! триса - 3г, глицина-14.4, SDS-1г или 10мл 10% на 1Л готового раствора.

---делаю трис-глициновый буфер 10х: 144г глицина, 10г SDS, 30г Tris и до 1л воды.
А вот это правильно!!!
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 15.12.2006 14:43     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #42 множественное цитирование

---До 1х это допустим 100 мл 10хSDS+1000 мл воды?

Что есть 10х SDS в этой фразе? Если вот это: "10% сток т.е. на 100мл воды 10г СДС", то "НЕ ДОПУСТИМ".
Участник оффлайн! Masha11




 прочитанное сообщение 16.12.2006 14:11     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #43 множественное цитирование

что-то я не пойму цели? вам что нужно сдс получить чтоль однократный или все- таки тяжелый буфер??? если однократный тяжелый буфер, то наливаете 100 мл 10х и доводите до 1 литра водой. усё)
Участник оффлайн! Pavel2
Участник



 прочитанное сообщение 19.12.2006 15:33     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #44 множественное цитирование

Я здесь ошибся "До 1х это допустим 100 мл 10хSDS+1000 мл воды?". Имел в виду 10хTGB.

Я вот еще что не понимаю.
В методике PAAG электрофорез белков дана таблица для приготовления TGB - Tris-base 15.1g, Glycine 94g SDS 50 мл (сток 10%) на 1L. Я так понимаю это 5xTGB?
А вот это тоже правильно?
---делаю трис-глициновый буфер 10х: 144г глицина, 10г SDS, 30г Tris и до 1л воды.
Получается расхождения по глицину, это не принципиально?
guest: ммм
IP-штамп: frHvyGooYAnV2
гость



 прочитанное сообщение 19.12.2006 16:00     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #45 множественное цитирование

-- трис-глициновый буфер 10х: 144г глицина, 10г SDS, 30г Tris и до 1л воды.

Это правильно. Это исходная система так сказать из первоисточника.

---15.1g, Glycine 94g SDS 50 мл (сток 10%) на 1L. Я так понимаю это 5xTGB?

Это какая-то модификация с перегрузом по глицину 94 вместо 72.

Вообще говоря, количество глицина весьма принципиально. Но все очень критично, если глицина недоложить и менее критично, если переложить. Небольшой перегруз по глицину позволяет использовать один электродный буфер для нескольких форезов. В процессе фореза из катодного буфера уходит часть глицина и приходит трис, соответственно отношение трис/глицин увеличивается, что есть плёхо, как я уже писал выше, некий запас глицина в исходном буфере позволяет использовать его повторно.

Короче, модификация для бедных и ленивых.

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): RRRR
Гость
IP-штамп: frNYJZecF5GO2
гость



 прочитанное сообщение 21.12.2006 12:10     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #46 множественное цитирование

Люди добрые, отзовитесь у кого есть в лаборатории PhastSistema, для быстого электрофореза, бьюсь одна, не биохимик, освоила изоэлектрофокусирование, на очереди SDS-электрофорез и 2D-электрофорез, методик нет. Помогите
Гость
IP-штамп: fra6xdMWXgbHc
гость



 прочитанное сообщение 27.12.2006 18:40     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #47 множественное цитирование

В раствор для нанесения белка (gel loading buffer
) зачем добавляют Dithiothreitol, он также как меркаптоэтанол востанавливает дисульфидные связи?
Участник оффлайн! Pavel2
Участник



 прочитанное сообщение 27.12.2006 19:01     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #48 множественное цитирование

->В процессе фореза из катодного буфера уходит часть глицина и приходит трис, соответственно отношение трис/глицин увеличивается, что есть плёхо, как я уже писал выше, некий запас глицина в исходном буфере позволяет использовать его повторно.
<-
А если слить весь буфер после фореза и перемешать отношение трис/глицин не выровняется заново?
Участник оффлайн! Pavel2
Участник



 прочитанное сообщение 27.12.2006 19:06     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #49 множественное цитирование

Еще такой вопрос, буфер с белками перед нанесением на гель нужно кипятить чтобы белки денатурировались?
Участник оффлайн! Tom1
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 27.12.2006 19:16     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #50 множественное цитирование

1. В принципе да если не боитесь что белки "убежавшие" в нижний буфер Вам помешают поетому обычно фитровал после смешивания....
2. А это зависит от задачи.......

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 19.11.17 00:37
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft