 * |   |
|
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда |  Zbio-wikiNG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: |
|
Правила
* Окрашивание белковых гелей Coomassie brilliant blue R250 -- comments to a permanent page of the site --
Тема связана с: Окрашивание гелей Кумасси R250
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.
   |
 Forum robotПостоянный участник на сервере в Москве  |
 11.01.2006 02:06
Метод наименее чувствительный (по сравнению с серебряным окрашиванием или окрашиванием Zn/имидазолом). Его делают популярным два сравнительных преимущества: (i) он проще и несравненно дешевле, чем серебряное окрашивание; (ii) в отличие от окрашивания Zn/имидазолом, гель можно высушить и сохранить. Чувствительность: 0.1-1.0 микрограмм белка на бэнд. |
|
_Павел Егоров_ IP-штамп: frftLGqhpFF.A гость |
11.01.2006 02:06
|
|
_arwerha_ IP-штамп: frftLGqhpFF.A гость |
11.01.2006 03:39
Главное его преимущество - то, что через час Вы уже сможете узнать о том, что Ваш белок опять не там (или там, если повезло) Ну, и реактивы без всякого особо ядовитого метанола. Спирт, уксус... Краситель: 0,22% (масс/об) Кумасси G-250, 40% (об/об) этанол, 8% (об/об) уксусная кислота. Гель залить красителем, нагреть до появления пара (на горелке или в микроволновке - у кого что есть) , под крышкой оставить минут на 15, после чего краситель слить обратно в колбу (он работает долго без замены). Гель отмывать от фона кипячением в нескольких сменах воды (из-под крана или дистиллята, это не очень принципиально) до исчезновения окраски фона и проявления полос белка. |
|
Alder Постоянный участник |
11.01.2006 20:25
только это к другой страничке, где окраска с использованием G-250 |
|
_Valery Tarasov_ IP-штамп: frftLGqhpFF.A гость |
11.01.2006 22:37
1. 10-15 минут в 10% Укс.к., 40% этанол - фиксация 2. 20 мин. в 0.4% Coomassie Blue R250, 10% Укс.к., 40% этанол - окрашивание 3. 20 мин. в 10% Укс.к. - отмывка (если белка много то и после первых минут видны полосы) |
|
Olori |
07.09.2006 21:19
|
|
bkrg |
26.10.2006 15:35
За 10 мин. до окончания фореза ставится кастрюлька с водой на плитку. К моменту окончания фореза она закипает. Гель кидается в стакан, заливается раствором следующего состава: этанол - 300мл, вода - 300мл, ледяная уксусная к-та - 60мл, кумасси R250 - 0,7г. Наливать не очень много, но так, чтобы гель свободно болтался в жидкости. Кипятим стакан на водяной бане - 10мин. Краску сливаем (ее можно использовать многократно), ополаскиваем гель в стакане водой, заливаем 7%уксусом (столько же, сколько и краски) и кипятим 3-5 мин. Меняем уксус, снова кипятим. После 3й смены гель гарантированно отмывается. Все делать под тягой. Кипятить с краской обязательно на водяной бане, иначе она будет плеваться во все стороны |
|
curious67 Постоянный участник |
26.10.2006 15:46
А что, помыть в горячей воде (те использую слово кипяток, ибо риск) перед окрашиванием снижает фон? |
|
Гость IP-штамп: frsCQkPH3djzA гость |
07.11.2007 01:11
Красится и отмывается без кипячения за 20 мин. у меня была ссылка на протокал в статье 70х или 80х годов. |
|
Guest IP-штамп: frNFBHcL2JSwo гость |
07.11.2007 01:17
|
|
Guest IP-штамп: frPanb9Lvzu1g гость |
07.11.2007 22:25
 С G-250 - коллоидный раство получают, постепенно примешивая раствор красителя к 10% ТХУ, получается эдакая смесь цвета хаки. Фон, действительно, слабее, но и чувствительность ниже - потому что окрашиваются белки только на поверхности геля, а не по всей толще, т.к. колллоидный раствор плохо проникает. Если готовить раствор красителя не с этанолом, а изопропанолом, то SDS диссоциирует быстрее и фиксация происходит лучше. К тому же лучше, чем при стандартной процедуре, окрашиваются гликопротеиды. А для хорошей отмывки, не распространяя вокруг себя аппетитные пары уксуса с этанолом удобно погрузить белок в отмывочный раство с 10% глицерином - гель сжимается и белеет, при возвращении в нормальную среду восстанавливается в размерах, но фон гораздо ниже (личное наблюдение ).Убирать краску можно легко, добавляя в отмывочный раствор куски поролона - замечательно экстрагирует кумасси. |
|
Гость IP-штамп: frw3GfipDY0Lk гость |
16.01.2009 14:21
Граждане, все можно сделать еще проще и быстрее. При окрашивании геля Кумасси R-250 довести раствор краски с положенным в него гелем до кипения в микроволновке (это буквально одна минута) и все. Никакая фиксация не нужна, белки фиксируются уже в краске. Дальше можете уже отмывать в воде при кипении. Налейте в пластиковую коробочку для микроволновки воду (побольше) и доведите до кипения (минуты 3). Кипятить не надо, можно отмыть нужную полосу. Набросайте фильтровальную бумагу (любую, которую не жалко, хоть туалетную) и покачивайте, пока синий фон из геля не перейдет в бумагу. Затем воду смените и процедуру повторите. Все! Окрашивание закончено! На все-про-все - 10-15 минут! Если хотите удалить из геля SDS (чтобы раствор краски после использования можно было хранить и использовать бесконечно долго), вместо обычной процедуры фиксации, наверное, можно попробовать кипятить гель в воде до окрашивания, как предлагалось выше. Никогда не пробовала, однако, метод кажется вполне разумным. |
|
metrim Постоянный участник Москва |
25.01.2016 12:21
|
|
R.J.Dio Постоянный участник |
25.01.2016 12:55
|
|
metrim Постоянный участник Москва |
26.01.2016 01:45
НУ раз "все юзают этанол", а ето в отличии от метанола у меня практически неограничено, бум его лить |
|
R.J.Dio Постоянный участник |
26.01.2016 12:18
|
|
watchesbiz Постоянный участник |
 25.11.2021 07:35
|
|
watchesonline89 Постоянный участник |
27.12.2022 09:25
|
| « Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |
 |
· Викимарт - все интернет-магазины в одном месте · Доска объявлений Board.com.ua ·
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---
Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Powered by Invision Power Board(Trial) v2.0.0 © 2024 IPS, Inc.