Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
Forum robot Постоянный участник на сервере в Москве |
Экспресс-метод выделения плазмидной ДНК. Очень удобный, когда требуется быстро проанализировать наличие вставки в векторе, размер плазмиды и т.п. На форезе видны геномная DNA, pDNA, рибосомная RNA и tRNA. Если размер pDNA меньше 3.5-4kbp она идёт слишком близко к рибосомной RNA и для аккуратного определения размера требуется включить обработку RNase. |
Гость IP-штамп: frCCxagoxzeik гость |
|
Guest IP-штамп: frGqyYT8IU7LU гость |
|
DNAuser |
|
guest: Igor IP-штамп: frCCxagoxzeik гость |
а какие минусы при экспресс методе? Можно ли использовать дальше для секвенирования полученную таким образом пДНК, разумеется после вырезания с агарозного геля? Заранее спасибо. |
curious67 Постоянный участник |
Сообщение было отредактировано curious67 - 15.02.2007 16:09 |
guest: Igor IP-штамп: frp8C4tKmL1.E гость |
|
би-олух Участник |
|
curious67 Постоянный участник |
|
би-олух Участник |
Спасибо! Мне тоже так показалось. Только, если совсем не фенолить, то надо аккура-атненько, а то гадость всякая будет плавать. А если с хлороформиком открутить, то вполне чистенько и быстренько получается. Хотя, это, наверное, кто как привык |
curious67 Постоянный участник |
Сообщение было отредактировано curious67 - 17.02.2007 16:38 |
Dzmitry Участник |
40µl Ф:Х - это фенол и хлороформ? В какой пропорции? Какие концентрации? Или что? |
curious67 Постоянный участник |
Во-вторых, Ф:Х бывает по-разному, я люблю Х побольше, чтобы потом еще раз не добавлять чисто Х. Рутинно, я добавляю от 1/2 до 2/3 Ф к водному раствору, трясу до белой пены, после чего добавляется Х реально по вкусу, но поскольку так методики не пишутся, раза в 1.5 больше, чем Ф (по прописи 1:1,но с учетом трудности пипетирования Х из-за его текучести и быстрого испарения, Х попадает в пробирку меньше, чем Вы выставили на самплере). Вотб и снова яростно потрясти. Все. Счастье. Крутить по макс 3 мин Сообщение было отредактировано curious67 - 20.02.2007 17:57 |
Dzmitry Участник |
|
guest: al IP-штамп: froCfVMLWiGRs гость |
(curious67 @ 20.02.2007 16:55) во-первых, слово хлороформ нужно понимать как 24:1 хлороформ:изоамиловый спирт, это всегда так, смешиваете и забываете Ну, это классика, всегда так было. Только вот мне давно очень любопытно - а для чего изоамиловый нужен? Чем плох один хлороформ? Может кто знает? |
Guеst IP-штамп: frlP9jDcX5Elk гость |
(guest: al @ 21.02.2007 14:47) пенится сильнее |
curious67 Постоянный участник |
|
curious67 Постоянный участник |
(Guеst @ 21.02.2007 18:20) полная чушь- попробуйте вспеньте хлороформ!!!!!!!! |
K6O6T613 |
Хотя идея, что изоамиловый спирт - это ПАВ, увлекающий белки в орг.фазу, мне нравится больше. |
The problem Постоянный участник |
Не берите в голову, Вам же им не дышать (надеюсь!), не траванетесь |
Гость IP-штамп: frGqyYT8IU7LU гость |
|
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |