Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Экспресс-метод выделения pDNA -- comments to a permanent page of the site --
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Тема связана с: Экспресс-метод
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! Forum robot
Постоянный участник
на сервере в Москве



 прочитанное сообщение 21.08.2006 13:52     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Комментарии к постоянной странице сайта: Экспресс-метод выделения pDNA

Экспресс-метод выделения плазмидной ДНК. Очень удобный, когда требуется быстро проанализировать наличие вставки в векторе, размер плазмиды и т.п. На форезе видны геномная DNA, pDNA, рибосомная RNA и tRNA. Если размер pDNA меньше 3.5-4kbp она идёт слишком близко к рибосомной RNA и для аккуратного определения размера требуется включить обработку RNase.
Гость
IP-штамп: frCCxagoxzeik
гость



 прочитанное сообщение 31.10.2006 13:53     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

A chto predstavljaet soboj SDS(+)-буфер?
Guest
IP-штамп: frGqyYT8IU7LU
гость



 прочитанное сообщение 31.10.2006 14:21     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

какой такой?
Участник оффлайн! DNAuser




 прочитанное сообщение 02.11.2006 23:19     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

У меня недавно времени не было для минипрепа, и наткнулся на даный метод. Хороший метод для быстрого анализа, к тому же отфенолил без SDS - получилось красиво, и вышеописанная проблема выскальзывания не возникла ни разу.
guest: Igor
IP-штамп: frCCxagoxzeik
гость



 прочитанное сообщение 15.02.2007 14:31     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

Добрый день,
а какие минусы при экспресс методе? Можно ли использовать дальше для секвенирования полученную таким образом пДНК, разумеется после вырезания с агарозного геля?
Заранее спасибо.
Участник оффлайн! curious67
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 15.02.2007 16:09     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

таким методом можно только относительно быстро проскринировать несколько десятков клонов на наличие вставки, более ни для чего такая "ДНК" не годится, разумеется. Но то же самое много быстрее и проще можно сделать ПЦРом прямо с колоний, несколько сотен за раз -не проблема. А потом что так, что эдак наращивать и выделять по-человечески, ПЦР культурнее и грязи меньше вокруг

Сообщение было отредактировано curious67 - 15.02.2007 16:09
guest: Igor
IP-штамп: frp8C4tKmL1.E
гость



 прочитанное сообщение 15.02.2007 22:37     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

Большое спасибо за ответ!
Участник оффлайн! би-олух
Участник



 прочитанное сообщение 16.02.2007 17:09     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

А если вместо Ф+Х взять просто хлороформ. По идее, ничего особенно не поменяется?
Участник оффлайн! curious67
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 16.02.2007 18:23     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

только не все белки уйдут. Можно ыообще не фенолить, соотв. не хлороформить, для сиквенса и рестрикции аналитической сойдет и так, убрать соли 80% спиртом, и ладушки
Участник оффлайн! би-олух
Участник



 прочитанное сообщение 17.02.2007 10:49     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование

"только не все белки уйдут. Можно ыообще не фенолить, соотв. не хлороформить, для сиквенса и рестрикции аналитической сойдет и так, убрать соли 80% спиртом, и ладушки "

Спасибо!
Мне тоже так показалось.
Только, если совсем не фенолить, то надо аккура-атненько, а то гадость всякая будет плавать. А если с хлороформиком открутить, то вполне чистенько и быстренько получается.

Хотя, это, наверное, кто как привык smile.gif
Участник оффлайн! curious67
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 17.02.2007 16:37     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #11 множественное цитирование

хлороформ ничему не повредит, это точно. Хотя у меня и без него ничего не плавает- кручу 13400 об. 10 мин при комн. Т, это после нейтрализации, потом изопропиловый спирт и все. Не забывать промывать хорошенько 80% этанолом

Сообщение было отредактировано curious67 - 17.02.2007 16:38
Участник оффлайн! Dzmitry
Участник



 прочитанное сообщение 20.02.2007 17:14     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #12 множественное цитирование

Поясните плиз этот момент

40µl Ф:Х - это фенол и хлороформ? В какой пропорции? Какие концентрации? Или что?
Участник оффлайн! curious67
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 20.02.2007 17:55     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #13 множественное цитирование

во-первых, слово хлороформ нужно понимать как 24:1 хлороформ:изоамиловый спирт, это всегда так, смешиваете и забываете
Во-вторых, Ф:Х бывает по-разному, я люблю Х побольше, чтобы потом еще раз не добавлять чисто Х. Рутинно, я добавляю от 1/2 до 2/3 Ф к водному раствору, трясу до белой пены, после чего добавляется Х реально по вкусу, но поскольку так методики не пишутся, раза в 1.5 больше, чем Ф (по прописи 1:1,но с учетом трудности пипетирования Х из-за его текучести и быстрого испарения, Х попадает в пробирку меньше, чем Вы выставили на самплере). Вотб и снова яростно потрясти. Все. Счастье. Крутить по макс 3 мин

Сообщение было отредактировано curious67 - 20.02.2007 17:57
Участник оффлайн! Dzmitry
Участник



 прочитанное сообщение 20.02.2007 21:12     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #14 множественное цитирование

Ясно. спасибо.
guest: al
IP-штамп: froCfVMLWiGRs
гость



 прочитанное сообщение 21.02.2007 16:47     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #15 множественное цитирование

(curious67 @ 20.02.2007 16:55)
Ссылка на исходное сообщение  во-первых, слово хлороформ нужно понимать как 24:1 хлороформ:изоамиловый спирт, это всегда так, смешиваете и забываете


Ну, это классика, всегда так было.

Только вот мне давно очень любопытно - а для чего изоамиловый
нужен? Чем плох один хлороформ?
Может кто знает?
Guеst
IP-штамп: frlP9jDcX5Elk
гость



 прочитанное сообщение 21.02.2007 18:20     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #16 множественное цитирование

(guest: al @ 21.02.2007 14:47)
Ссылка на исходное сообщение  Чем плох один хлороформ?
Может кто знает?

пенится сильнее
Участник оффлайн! curious67
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 21.02.2007 18:21     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #17 множественное цитирование

это просто- из курса коллоидной химии. Изоамил- ПАВ, который как все ПАВы, снижает поверхностное натяжение, поэтому фазы лучше разделяются. Литература по этому поводу будет интересная- не из PubMed-просто что-нибудь из Верна или Стивенсона- как китовый жир при шторме льют за борт
Участник оффлайн! curious67
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 21.02.2007 21:08     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #18 множественное цитирование

(Guеst @ 21.02.2007 18:20)
Ссылка на исходное сообщение  пенится сильнее

полная чушь- попробуйте вспеньте хлороформ!!!!!!!!
Участник оффлайн! K6O6T613




 прочитанное сообщение 18.02.2008 17:46     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #19 множественное цитирование

Один хлороформ при стоянии превращается во всякую гадость типа фосгена. Обычно добавляют 0.5% метанола для стабилизации или серебряную фольгу (для использования в оргюсинтезе или ЯМР соответственно). 1/25 часть изоамилового спирта в хлороформе также может оказывать стаб. действие...

Хотя идея, что изоамиловый спирт - это ПАВ, увлекающий белки в орг.фазу, мне нравится больше.
Участник оффлайн! The problem
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 18.02.2008 21:29     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #20 множественное цитирование

хлороформ превращается в фосген- утверждение сильное- на самом деле, фосген имеется в следовых количествах, и может чему-то там и вредит, но уж точно не ДНке.
Не берите в голову, Вам же им не дышать (надеюсь!), не траванетесь
Гость
IP-штамп: frGqyYT8IU7LU
гость



 прочитанное сообщение 16.04.2008 14:13     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #21 множественное цитирование

а фенол сатурированый буфером или водой?
Участник оффлайн! watchesonline89
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  23.12.2022 12:17     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #22 множественное цитирование

https://omegawatches89.mystrikingly.com/
https://www.deviantart.com/omegawatches89/j...pular-930508248
https://eatsleepride.com/c/383270
https://fortunetelleroracle.com/fashion/ama...s-online-737627
https://www.intensedebate.com/people/omegawatches89
https://fortunetelleroracle.com/fashion-acc...-popular-737613
https://anotepad.com/notes/ykiydhnj
https://medium.com/@omegawatches89/amazing-...ne-b4863ed55af0
https://omegawatches90.mystrikingly.com/
https://62e8ce2ae5d50.site123.me/blog/repli...ve-items-online
https://62e8da780bf7c.site123.me/
https://padlet.com/omegawatches89/9ibenzfwbcer7k71
https://omegawatches89.simplesite.com/452939012
https://62e8da780bf7c.site123.me/blog/excit...-replica-online
https://62e8ce2ae5d50.site123.me/blog/advan...replica-watches

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 28.03.24 21:12
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft