Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
Гость IP-штамп: frTlWdNmzlEpc гость |
У нас достаточно гидрофобный белок. В состав лизирующего буфера входит мочевина. Можно ли как-то использовать метод высаливания? Совместимо ли использование мочевины с этим методом? |
форма жизни |
Не бойтесь высолить белок "с запасом", сделайте 0,9-0,95 насыщения при +4 и после ночного перемешивания отфильтруйте белок. Только не пытайтесь "подсушить" осадок, пусть будет влажным - иначе белок денатурирует. Часто высаливание лучше проводить из буфера, содержащего ДТТ (дитиотрейтол). Если вам известно, что белок легко окисляется или есть какие-то предположения на этот счет, то 5мМ ДТТ могут облегчить жизнь.
|
форма жизни |
И еще имейте в виду, что присутствие мочевины изменит "точки высаливания" других белков, что для вас тоже может иметь значение.
|
Гость IP-штамп: frTlWdNmzlEpc гость |
|
guest: NBSC IP-штамп: frIPUyB0jVJss гость |
У меня отработана методика получения нужного белка с помощью хроматографии после высаливания, с которой я работаю уже давно, но хочется попробовать еще и другие способы. Иногда получаются дополнительные варианты разделения. Еще раз спасибо, отправляюсь на море работать. После возвращения напишу, помогло ли. |
Guest IP-штамп: frwCBzAO1VbsY гость |
|
guest: ммм IP-штамп: fr//M2zwa77cE гость |
|
Яна |
(Ъ @ 19.08.2007 12:47) Я так понимаю, что уже поздно что либо писать, но я Яна и реально существую на сайте уже давно, поэтому папрашу осторожнее с никами только на сайт захожу очень редко поэтому только сейчас прочитала про "инсинуации" в мой адрес. А за тему спасибо, несколько полезных идей для себя подчерпнула. Сообщение было отредактировано Яна - 28.10.2008 23:52 |
Guest IP-штамп: frGqyYT8IU7LU гость |
|
Ъ IP-штамп: frNwv0U1khjS. гость |
(guest: ммм @ 25.10.2008 23:20) Нуклеиновые кислоты сильно гидрофильнее белка. Чтобы они выпали сами собой нужно либо добавить спирт. ... либо цетавлон... |
Гость IP-штамп: frlnAsDr.5x7A гость |
|
Guest IP-штамп: frGqyYT8IU7LU гость |
Соосаждение нуклеиновых кислот с белками при сульфат-аммонийном фракционировании - это рядовое хорошо известное явление. Клеточный лизат или разрушеная ткань или еще какой-либо первичный биологический источник нужного вам белка (фермента) фракционируют сульфатом аммония, но при этом все понимают, что на начальном этапе ВСЕГДА происходит соосаждение НК, точнее соосаждаются фрагменты нуклеиновых кислот весьма гетерогенные по мольвесу и составу. При дальнейшей очистке от НК отделяются. Так что не путайте, пожалуйста, разные понятия. Высальвание белков сульфатом и соосаждение нуклеиновых кислот белковыми сульфат-аммонийными осадками - это разные процессы. |
Гость IP-штамп: frlnAsDr.5x7A гость |
"В осадок"-имеется ввиду осадок, обазующийся в клеточном лизате при добавлении к нему сульфата аммония. Ясное дело что НК сульфатом из водного раствора не высадятся =), но вот то что не будет 100% очистки от них - показано. Рад что факт соосаждения для вас-очевидная и общеизвестный процесс. |
Гость IP-штамп: frlnAsDr.5x7A гость |
*очевидный |
guest: Алиса IP-штамп: frMnW0t8R1Wd6 гость |
У меня вопрос не профессионала, а человека всего лишь интересующегося. При высаливании сульфатом аммония различных фракций белков из плазмы крови что происходит с липопротеинами, не осаждаются ли они, не изменяют ли своих свойств?!! В справочниках по биохимии ничего по этому поводу не нашла! Заранее спасибо большое! |
guest: ммм IP-штамп: frwHRv5zEzGDY гость |
Должны. --не изменяют ли своих свойств? Строго говоря они их изменяют уже тогда, когда вы извлекли их из кровотока. Но если подходить к этому вопросу грубо. Не должны! |
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |