Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
Forum robot Постоянный участник на сервере в Москве |
|
к IP-штамп: frQtbDwjgPMwo гость |
|
_Sanya_ IP-штамп: frftLGqhpFF.A гость |
Осадок белка можно промывать однократно ледяным ацетоном (80% - 100%) |
Serg-66 |
|
Layelleth |
- Липиды по моему опыту очень мешают обычному денатурирующему форезу в ПААГ - если их много. А в моем случае липидов много |
Tom1 Постоянный участник |
|
guest: ммм IP-штамп: frHvyGooYAnV2 гость |
|
lirrok |
|
guest: ммм IP-штамп: frHvyGooYAnV2 гость |
Ну как,как? Если количественно весь белок высаживать, то охладить раствор с белком до 00С, а ацетон градусов до -20 и медленно, в течении минутки, долить 4-5V ледяного ацетона в раствор белка, перемешивая, и на -200 - минимум на час, максимум - навсегда. Время выдержки на -20 зависит от концентрации белка: если белка очень много то может хватить и 10', если мало, то суток обычно достаточно. Внимание! В ацетоне практически нерастворимы неорганические соли, поэтому, если они присутствуют в высоких концентрация в исходном растворе белка, то выпадают в осадок вместе с белком и загрязняют его. |
lirrok |
|
lirrok |
Не "дольше", а "дальше" :-) |
Oleg Klychnikov Постоянный участник Moscow/Amsterdam->Leiden |
(guest: ммм @ 01.02.2007 11:34) Внимание! В ацетоне практически нерастворимы неорганические соли, поэтому, если они присутствуют в высоких концентрация в исходном растворе белка, то выпадают в осадок вместе с белком и загрязняют его. 4 объема ацетона к одному объему белка (80%) на ночь на -20 и будет вам счастье после этого фуговать эдак 10-20(30) мин, эдак 10-20 kg при 4С отобрать супер, сушить - можно на спидваке, можно просто открыть эппендорфу, если нужна активность после такого издевательства, то сушить лучше на -20 с открытыми пробирками и фсе надо только иметь ввиду, что как любой метод преципитации, ацетонирование имеет свои ограничения на количество белка (если его мкг - то надо ко-преципитировать), на всякие разные детергенты, если есть в буфере (белок просто может не сесть), ну и всяки другие прелести, так, что лучше всего пробовать на не очень дорогом для сердца образце пилотное высаживание только в этом топике - это офф-топ Сообщение было отредактировано Oleg Klychnikov - 01.02.2007 15:54 |
Гость IP-штамп: frvrUlzpAIyfs гость |
|
Guest IP-штамп: frPanb9Lvzu1g гость |
|
Гость IP-штамп: frTX1Bt2UC3vE гость |
|
plotter Постоянный участник Стыдно признаваться о том, где живу... |
|
guest: ммм IP-штамп: frwHRv5zEzGDY гость |
А почему вы думаете, что он там остается. Тритон вроде в ТХУ растворим. Ну промойте метанолом, а затем метанолом с изобутанолом, вот как-то так. |
Vadim Sharov Постоянный участник Россия |
|
david Постоянный участник Montreal, Canada |
|
plotter Постоянный участник Стыдно признаваться о том, где живу... |
Но тут такая система, что и не такое бывает... |
guest: ммм IP-штамп: frwHRv5zEzGDY гость |
Гхм! А может это дезоксихолат или любые другие органические кислоты(или их соли). --И pH другой сильно. ЧТО!!! рН НЕ КИСЛЫЙ?!! Значит вы мало льете кислоты(ТХУК) или у вас исходно сильно щелочная среда возможно имеет смысл подкислить ее перед осаждением уксусом или фосфорной кислотой. Тритон на рН не влияет и сам вроде в кислой среде растворим. |
plotter Постоянный участник Стыдно признаваться о том, где живу... |
Дезоксихолат не заказал ещё Бум курить... |
Гость IP-штамп: fr7Ufi3qeYVAg гость |
|
Гость IP-штамп: frQVis2YTy5L2 гость |
|
Vadim Sharov Постоянный участник Россия |
(Гость @ 07.04.2009 21:35) Подскажие, пожайлуста, что подойдет для мгновенной коагуляции белка для качественного анализа? Почему именно ТХУ так распространена для осаждения? Каков механизм ваимоействия ТХУ с беком? Есть такой автор Остерман. Почитайте. |
guest: plotter IP-штамп: frlnAsDr.5x7A гость |
|
guest: ммм IP-штамп: frwHRv5zEzGDY гость |
Я думаю вам их с радостью обменяют на 100кг ТХУК |
Seleniti IP-штамп: frdHXkjSmVgA. гость |
|
guest: ммм IP-штамп: frQlBxj4iQSg. гость |
1) В обсуждаемом протоколе, указанные вами процедуры отсутствуют. 2) От ТХУК вы не избавитесь, просто она перейдет в соль тихлорацетат натрия. |
guest: валерий IP-штамп: fr/FWcWysIOtM гость |
|
guest: ммм IP-штамп: frwHRv5zEzGDY гость |
Алкилировать не может, может ацилировать. Но вероятность низкая, возможно ваш белок модифицировался еще на стадии(ях) где-то до осаждения. |
watchesonline89 Постоянный участник |
|
watchesonline89 Постоянный участник |
|
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |