Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
guest: ммм IP-штамп: frwHRv5zEzGDY гость |
Должно. Там между и внутри полосок ионов хлора и полосок инов глицина, находиртся мазня деградухи из олигопептидов. |
RRRR |
|
guest: guest IP-штамп: frvKFLgw5/Osg гость |
Проверьте pH буферофф и приготовте новый ПСА. |
guest: ммм IP-штамп: frwHRv5zEzGDY гость |
Давайте без сумбура. Яд: какие размеры компонентов? Маркер: от скольки до скольки? Вы фронт БФС выоняете из геля или нет? -нижних белков нет – пластинка геля кончилась Что значит нет? Они не разделились или вы их выгнали из геля. А так похоже на то, что вы напортачили с процентностью АА. Возможно у вас просто наврана концентрация в стоке. |
RRRR |
Яд: какие размеры компонентов? Маркер: от скольки до скольки? Вы фронт БФС выоняете из геля или нет? -нижних белков нет – пластинка геля кончилась Что значит нет? Они не разделились или вы их выгнали из геля. А так похоже на то, что вы напортачили с процентностью АА. Возможно у вас просто наврана концентрация в стоке. [/quote] яд - большая часть - это ферменты. диапазон 14-200кДа. маркер - 11-250 кДа (ферментас). я так понимаю - поскольку они не с начала пластинки стали разгоняться - им просто не хватило места. ориентируясь по маркеру разогнались 250-55. а на 36-11 - гель кончился. АА - 30г акрила, 0,8бис-АА на 100мл воды. |
guest: ммм IP-штамп: frwHRv5zEzGDY гость |
Много лишнего думаете. У вас не та процентность акриламида. В 15% акриламиде 250 кда в любом буфере никуда не двинутся. От чего могут быть варианты: Плохо перемешали смесь пред заливкой, но тогда были бы и другие косяки. Ваш исходник акриламида не 30 процентный. Сам сухой акриламид возможно поганый. Кстаи 30 процентный мог например частично заполимеризоваться в банке, а вы сверху водичку берете почти без акриламида. Короче ищите вокруг процентности акриламида и будет вам счастие. |
RRRR |
|
guest: ммм IP-штамп: frwHRv5zEzGDY гость |
Никакого данного случая... Ваша цитата: --Меняла % геля от 7,5 до 15 – не помогло. Т.е. по вашим же словам в 15% геле 250кДа убегают на 2 см. А они даже не войдут в такой гель. |
guest: plotter IP-штамп: frlnAsDr.5x7A гость |
|
ужик |
|
Alenka-s |
|
guest: ммм IP-штамп: frwHRv5zEzGDY гость |
Стандартным. И вообще сэмпл-буфер на окраску практически не влияет. Если это не какая-то экзотика, в которой происходит химическая модификация белка(востановление SH не считается).
|
Alenka-s |
(guest: ммм @ 05.08.2009 18:25) -Народ, подскажите, пожалуйста, каким лучше пользоваться буфером образцов при окрашивании серебром? спасибо. Стандартным. И вообще сэмпл-буфер на окраску практически не влияет. Если это не какая-то экзотика, в которой происходит химическая модификация белка(востановление SH не считается). огромное спасибо) |
Yolina |
|
guest: ммм IP-штамп: frwzUkJeG5fZ. гость |
12-13% |
Yolina |
|
guest: ммм IP-штамп: frCNCa5alkkCM гость |
Страшно, не фиг здесь вопросы задавать. Нет доверия зачем спрашиваешь. А вообще, уверен войдет, зуб даю(с дыркой ) |
Yolina |
|
Guest IP-штамп: frE1krxZbrc3w гость |
13% имха многовато будет можно и 10% обойтись. Однако если хотите картинку надо градиент делать типа 9-15 |
Guest IP-штамп: frE1krxZbrc3w гость |
|
guest: ммм IP-штамп: frCNCa5alkkCM гость |
В 10% 12 и 25 будут плохо выглядеть. А 70 и в 14 войдут только высоковато будет. -имха я этот зуб ( скорее всего последний ) не взял бы. А вам и не предлагают. У вас своих костей в избытке. |
plotter Постоянный участник Стыдно признаваться о том, где живу... |
|
plotter Постоянный участник Стыдно признаваться о том, где живу... |
1. А концентрация APS не завышена в этой методике? 2. Насколько долго гель может простоять с APS но без TEMED и не заполимеризоваться? |
angel eyes The bad Россия, Е-бург |
|
RRRR |
подскажите, пожалуйста, где прочитать методику как это сделать |
guest: ммм IP-штамп: frTTCS0/dAHf2 гость |
в Остермане |
plotter Постоянный участник Стыдно признаваться о том, где живу... |
|
guest: ммм IP-штамп: frwHRv5zEzGDY гость |
|
plotter Постоянный участник Стыдно признаваться о том, где живу... |
|
guest: ммм IP-штамп: frwHRv5zEzGDY гость |
|
Vydumchik |
|
Настасья |
|
bukach Постоянный участник Geneva, Switzerland |
(Настасья @ 27.03.2010 16:15) Здравствуйте!У меня проблема - делаю электродный буфер 10x, по схеме на литр 30,3 трис-основание, 144 г глицин, 10 г СДС,компоненты беру в расчете на 250 мл.рН получается в районе 8.9, 2 раз переделывала. Что не так?:-(Помогите! все нормально. не нервничайте, так и должно быть. спокойно разводите и ставьте форез. попробуйте у однократного перемерить рН ) а ещё можно почитать про солевую ошибку и коэффициент активности и что с ними происходит при высоких концентрациях Сообщение было отредактировано bukach - 30.03.2010 01:04 |
Sheli IP-штамп: frcw2tNV4HxN2 гость |
|
guest: ммм IP-штамп: frwHRv5zEzGDY гость |
Сильно размоется зона при таком подходе. Если вас это устраивает гоните в борнокислотном растворе 50-100мМ, с соответствующим рН. |
Sheli IP-штамп: fr3ey5NdueGxM гость |
Задача посмотреть образуется ли димер; если все размоется наверное это не совсем хорошо, могу полосу димера не увидеть, а хочется.При кислом рН скажем 5.0 не должно быть размывания? |
guest: ммм IP-штамп: frHqvNn2RQAmc гость |
Нет размывания не должно быть при ступенчатой буферной системе - она кислая. -Задача посмотреть образуется ли димер; если все размоется наверное это не совсем хорошо, могу полосу димера не увидеть Чем больше масса мономера тем легче увидеть димер. Увидеть вполне реально и на непрерывной буферной системе. |
Sheli IP-штамп: frcw2tNV4HxN2 гость |
мономерчик 24 кДа, не очень-то большой |
guest: ммм IP-штамп: frwHRv5zEzGDY гость |
|
Microbius IP-штамп: frG/ehwVgdnf. гость |
Подскажите, возможно ли возобновить активность старого, очень старого TEMED путём перегонки для дальнейшего его использования. Благодарю. :-) |
guest: ммм IP-штамп: frPZdWSNeN.0k гость |
А вы попропобуйте, скорее да чем нет. |
Beonick Постоянный участник |
|
guest: ммм IP-штамп: frzbfAE0vSQrM гость |
Соли это могут быть - фосфаты, сульфаты, бораты очень много тритона в пробе и посторонние полимеры заряженные - РНК, гепарин, альгинаты, полиакриловая кислота. Для начала пробу разбавьте в 3-5 раз и посмотрите, что будет дальше. |
Beonick Постоянный участник |
хм... Подозреваю что это все таки гепарин. Так как разгонял пробы эритроцитов и сыворотки, а туда наверняка давали гепарин когда брали кровь. Попробую разбавить. Как с этим еще можно бороться? Странно, раньше разгонял сыворотку, и сам же когда брал кровь добавлял гепарин - все было найс. Наверное в эти пробы хорошо гепарина ухнули. Но почему тогда белки нормально не разделились, гепарин наверное должен просто давать левый фон и разводы? |
Beonick Постоянный участник |
|
Dada |
Еще один вопрос, при проявке блотов полоски белков бывают очень четкие, а в следующий раз (при тех же условиях) они размыты. кажется проблема не в переносе и в антителах, а именно в форезе.В чем? Спасибо заранее за ответы |
MrDmitry Постоянный участник |
Стандартизация всегда даёт полную воспроизводимость результатов - относится ко всему - все реактивы, время, ток, температура (и реагентов) даже количество пипетирований при заливке геля, количество образца и буфер для него - всё-всё. Оцените сами чем отличается каждое ваше действие в протоколе в плохом и хорошем случае и Вы найдёте ответ Сообщение было отредактировано MrDmitry - 09.09.2010 01:02 |
guest: ммм IP-штамп: fr/pF91fVGwYU гость |
В 90% случаев это результат плохого прилегания боковушек к гелю, как следствие паразитный шунт, по которому течет ток и снижает разность потенциалов в этой области. --Еще один вопрос, при проявке блотов полоски белков бывают очень четкие, а в следующий раз (при тех же условиях) они размыты. Чаще всего 2 причины: 1) Гель перед переносом долго лежал(или лежал при более высокой температуре) прежде чем по нему пустили ток в перпендикулярном направлении. 2) Убежал фронт из геля и после этого гнали форез дольше чем обычно. |
Nicolai |
|
guest: plotter IP-штамп: frlnAsDr.5x7A гость |
Beonick, я плазму гонял (скорее от любопытства и наличия свободных треков). Без сильного перегруза получалось если брать примерно 1/5 мкл плазмы на трек. Но красить серебром, т.к. с моим коллоидом (~1.5ng чувствительность) кроме альбумина и глобулинов было мало что видно. Господа, кто делал 2-D "на коленке", поделитесь секретами. Очень хочется это сделать, но ради праздного любопытства брать камеру за 2k$ как-то... Вот если что интересного найду, тогда уж можно. |
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |