Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* PAAG электрофорез белков -- comments to a permanent page of the site --
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Тема связана с: SDS PAAG
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


страницы (10): « < 4 5 6 7 8 > »  
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 25.03.2009 12:17     Сообщение для модератора       

--Кажись, ее не должно быть...

Должно. Там между и внутри полосок ионов хлора и полосок инов глицина, находиртся мазня деградухи из олигопептидов.
Участник оффлайн! RRRR




 прочитанное сообщение 28.05.2009 14:45     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Доброго времени суток! Подскажите плз, в чем проблема: разгоняю раствор яда (2мг/мл) в биорадовской мини камере (высота пластинки разделяющего геля – 5см). разгонка начинается через 2см от края разделяющего геля и, соответственно, нижних белков нет – пластинка геля кончилась. Маркер тоже так гонится. Меняла % геля от 7,5 до 15 – не помогло. И еще. Какие параметры mA/V должны быть? Я включаю 40/200. Спасибо
guest: guest
IP-штамп: frvKFLgw5/Osg
гость



 прочитанное сообщение 28.05.2009 16:20     Сообщение для модератора       

значит у Вас милочка что-то не то с гелем.
Проверьте pH буферофф и приготовте новый ПСА.
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 28.05.2009 16:57     Сообщение для модератора       

-Подскажите плз, в чем проблема: разгоняю раствор яда (2мг/мл) в биорадовской мини камере (высота пластинки разделяющего геля – 5см). разгонка начинается через 2см от края разделяющего геля и, соответственно, нижних белков нет – пластинка геля кончилась. Маркер тоже так гонится. Меняла % геля от 7,5 до 15 – не помогло.

Давайте без сумбура.

Яд: какие размеры компонентов?

Маркер: от скольки до скольки?

Вы фронт БФС выоняете из геля или нет?

-нижних белков нет – пластинка геля кончилась

Что значит нет? Они не разделились или вы их выгнали из геля.

А так похоже на то, что вы напортачили с процентностью АА. Возможно у вас просто наврана концентрация в стоке.
Участник оффлайн! RRRR




 прочитанное сообщение 29.05.2009 05:08     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Давайте без сумбура.

Яд: какие размеры компонентов?

Маркер: от скольки до скольки?

Вы фронт БФС выоняете из геля или нет?

-нижних белков нет – пластинка геля кончилась

Что значит нет? Они не разделились или вы их выгнали из геля.

А так похоже на то, что вы напортачили с процентностью АА. Возможно у вас просто наврана концентрация в стоке.
[/quote]

яд - большая часть - это ферменты. диапазон 14-200кДа. маркер - 11-250 кДа (ферментас). я так понимаю - поскольку они не с начала пластинки стали разгоняться - им просто не хватило места. ориентируясь по маркеру разогнались 250-55. а на 36-11 - гель кончился. АА - 30г акрила, 0,8бис-АА на 100мл воды.
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 29.05.2009 14:36     Сообщение для модератора       

-я так понимаю ...
Много лишнего думаете.

У вас не та процентность акриламида. В 15% акриламиде 250 кда в любом буфере никуда не двинутся.

От чего могут быть варианты:

Плохо перемешали смесь пред заливкой, но тогда были бы и другие косяки.

Ваш исходник акриламида не 30 процентный.

Сам сухой акриламид возможно поганый. Кстаи 30 процентный мог например частично заполимеризоваться в банке, а вы сверху водичку берете почти без акриламида.

Короче ищите вокруг процентности акриламида и будет вам счастие.
Участник оффлайн! RRRR




 прочитанное сообщение 29.05.2009 14:42     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Спасибо, буду искать. только я не поняла, почему в данном случае АА получился 15%? на 100мл - 30г сухого вещества - это не 30? я неправильно считаю? а сколько надо брать?
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 29.05.2009 16:36     Сообщение для модератора       

-только я не поняла, почему в данном случае АА получился 15%?

Никакого данного случая...

Ваша цитата:
--Меняла % геля от 7,5 до 15 – не помогло.

Т.е. по вашим же словам в 15% геле 250кДа убегают на 2 см. А они даже не войдут в такой гель.
guest: plotter
IP-штамп: frlnAsDr.5x7A
гость



 прочитанное сообщение 29.05.2009 17:11     Сообщение для модератора       

15% это, по моему опыту, порядка 20-30kDa и никак не более. 200kDa маркер дальше 7% не уползает, хоть сутки гони. (это все для градиента)
Участник оффлайн! ужик




 прочитанное сообщение 23.07.2009 16:11     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Привет! кто нибудь занимается двумерным электрофорезом белков молока
Участник оффлайн! Alenka-s




 прочитанное сообщение 05.08.2009 14:06     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Народ, подскажите, пожалуйста, каким лучше пользоваться буфером образцов при окрашивании серебром? спасибо
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 05.08.2009 18:25     Сообщение для модератора       

-Народ, подскажите, пожалуйста, каким лучше пользоваться буфером образцов при окрашивании серебром? спасибо.

Стандартным. И вообще сэмпл-буфер на окраску практически не влияет. Если это не какая-то экзотика, в которой происходит химическая модификация белка(востановление SH не считается).

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): Alenka-s
Участник оффлайн! Alenka-s




 прочитанное сообщение 06.08.2009 12:13     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(guest: ммм @ 05.08.2009 18:25)
Ссылка на исходное сообщение  -Народ, подскажите, пожалуйста, каким лучше пользоваться буфером образцов при окрашивании серебром? спасибо.

Стандартным. И вообще сэмпл-буфер на окраску практически не влияет. Если это не какая-то экзотика, в которой происходит химическая модификация белка(востановление SH не считается).



огромное спасибо)
Участник оффлайн! Yolina




 прочитанное сообщение 20.09.2009 16:41     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Подскажите, пожалуйста, как определить концентрацию разрешающего геля для прогонки в PAAG высокогликозилированного белка, который под воздействием mercaptoethanol делится на несколько фрагментов с разным весом (70 kDa, 57 kDa, 25 kDa and 12.5 kDa)
guest: ммм
IP-штамп: frwzUkJeG5fZ.
гость



 прочитанное сообщение 20.09.2009 21:52     Сообщение для модератора       

-как определить концентрацию разрешающего геля для прогонки в PAAG высокогликозилированного белка.

12-13%
Участник оффлайн! Yolina




 прочитанное сообщение 21.09.2009 14:04     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

А не страшно ли, что весовые данные фрагментов так варьируют. Войдет ли в такой гель 70kDa фрагмент?
guest: ммм
IP-штамп: frCNCa5alkkCM
гость



 прочитанное сообщение 21.09.2009 16:39     Сообщение для модератора       

Yolina! Пилите. Они золотые<c>
Страшно, не фиг здесь вопросы задавать. Нет доверия зачем спрашиваешь.

А вообще, уверен войдет, зуб даю(с дыркой smile.gif )
Участник оффлайн! Yolina




 прочитанное сообщение 21.09.2009 20:15     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Спасибо, нужно очень быстро и очень точно, вот и перестраховываюсь ))
Guest
IP-штамп: frE1krxZbrc3w
гость



 прочитанное сообщение 21.09.2009 20:18     Сообщение для модератора       

имха я этот зуб ( скорее всего последний ) не взял бы.
13% имха многовато будет можно и 10% обойтись.
Однако если хотите картинку надо градиент делать типа 9-15
Guest
IP-штамп: frE1krxZbrc3w
гость



 прочитанное сообщение 21.09.2009 20:19     Сообщение для модератора       

P.S. быстро только сами знаите что бывает.
guest: ммм
IP-штамп: frCNCa5alkkCM
гость



 прочитанное сообщение 22.09.2009 08:46     Сообщение для модератора       

-13% имха многовато будет можно и 10% обойтись

В 10% 12 и 25 будут плохо выглядеть. А 70 и в 14 войдут только высоковато будет.

-имха я этот зуб ( скорее всего последний ) не взял бы.

А вам и не предлагают. У вас своих костей в избытке. smile.gif
Участник оффлайн! plotter
Постоянный участник
Стыдно признаваться о том, где живу...



 прочитанное сообщение 22.09.2009 11:18     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

А градинты вышли из моды? Залить 10-15% и радоваться.
Участник оффлайн! plotter
Постоянный участник
Стыдно признаваться о том, где живу...



 прочитанное сообщение 08.10.2009 20:16     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Пара не принципиальных вопросов.
1. А концентрация APS не завышена в этой методике?
2. Насколько долго гель может простоять с APS но без TEMED и не заполимеризоваться?
Участник оффлайн! angel eyes The bad

Россия, Е-бург



 прочитанное сообщение 08.10.2009 20:32     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо

експериментальне данные 12% гель простоял примерно сутки при комнатной температуре, а потом Псеудополимеризовался"
Участник оффлайн! RRRR




 прочитанное сообщение 09.10.2009 05:03     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

"А градинты вышли из моды? Залить 10-15% и радоваться."

подскажите, пожалуйста, где прочитать методику как это сделать
guest: ммм
IP-штамп: frTTCS0/dAHf2
гость



 прочитанное сообщение 09.10.2009 10:54     Сообщение для модератора       

--подскажите, пожалуйста, где прочитать методику как это сделать
в Остермане
Участник оффлайн! plotter
Постоянный участник
Стыдно признаваться о том, где живу...



 прочитанное сообщение 20.10.2009 15:26     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

У мну такой вопрос. Видел тут кто-то давал совет в градиент сахар добавлять. У меня потихоньку возникла такая же мысль. Короче, что если в плотный раствор градиента добавить сахарозы, скажем 10-20%. Не поможет ли это стабилизировать гель при заливке? Тобиж сделать его более однородным в горизонтальной плоскости.
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 20.10.2009 18:20     Сообщение для модератора       

Глицерин лучше сахарозы - вязкость выше. Это способ понизить продольное перемешивание, а не поперечное. Те таким образом понижают перемешивание концентрированных слоев с менее концентрированными. Кроме того если добавлять много полиола у вас будет сдвиг рН, а если он еще и по высоте будет меняться концентрация полиола, то будет градиет рН, так даже изофокусирование делали в 80-ые годы. Обычно глицерин добавляют в густой гель до 5% не более.
Участник оффлайн! plotter
Постоянный участник
Стыдно признаваться о том, где живу...



 прочитанное сообщение 21.10.2009 12:25     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Про поперечное я к тому, что при заливке иногда возникает формирование градиента в виде буквы V. Если вы понимаете о чем я. Вот от этого и хочу избавится.
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 21.10.2009 16:55     Сообщение для модератора       

Поперечному это не поможет, а только помешает. Тут просто не надо торопится, когда заливаешь и все будет чики-пики.
Участник оффлайн! Vydumchik




 прочитанное сообщение 01.12.2009 14:59     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Товарищи! Объясните, что такое анодная буферная система 1 по Мауреру?
Участник оффлайн! Настасья




 прочитанное сообщение 27.03.2010 15:15     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Здравствуйте!У меня проблема - делаю электродный буфер 10x, по схеме на литр 30,3 трис-основание, 144 г глицин, 10 г СДС,компоненты беру в расчете на 250 мл.рН получается в районе 8.9, 2 раз переделывала. Что не так?:-(Помогите!
Участник оффлайн! bukach
Постоянный участник
Geneva, Switzerland



 прочитанное сообщение 30.03.2010 01:02     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  ICQ

(Настасья @ 27.03.2010 16:15)
Ссылка на исходное сообщение  Здравствуйте!У меня проблема - делаю электродный буфер 10x, по схеме на литр 30,3 трис-основание, 144 г глицин, 10 г СДС,компоненты беру в расчете на 250 мл.рН получается в районе 8.9, 2 раз переделывала. Что не так?:-(Помогите!

все нормально. не нервничайте, так и должно быть. спокойно разводите и ставьте форез. попробуйте у однократного перемерить рН )
а ещё можно почитать про солевую ошибку и коэффициент активности и что с ними происходит при высоких концентрациях

Сообщение было отредактировано bukach - 30.03.2010 01:04
Sheli
IP-штамп: frcw2tNV4HxN2
гость



 прочитанное сообщение 28.04.2010 15:52     Сообщение для модератора       

подскажите пожалуиста где можно посмотреть протокол нативного фореза для белка с щелочной изоточкой (8.5), нашла при кислом рН но хотелось бы что-то около 6.0, ближе к физиологическим условиям.Спасибо
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 28.04.2010 16:20     Сообщение для модератора       

- бы что-то около 6.0

Сильно размоется зона при таком подходе.
Если вас это устраивает гоните в борнокислотном растворе 50-100мМ, с соответствующим рН.
Sheli
IP-штамп: fr3ey5NdueGxM
гость



 прочитанное сообщение 28.04.2010 23:22     Сообщение для модератора       

спасибо за ответ.
Задача посмотреть образуется ли димер; если все размоется наверное это не совсем хорошо, могу полосу димера не увидеть, а хочется.При кислом рН скажем 5.0 не должно быть размывания?
guest: ммм
IP-штамп: frHqvNn2RQAmc
гость



 прочитанное сообщение 29.04.2010 10:54     Сообщение для модератора       

--При кислом рН скажем 5.0 не должно быть размывания?

Нет размывания не должно быть при ступенчатой буферной системе - она кислая.

-Задача посмотреть образуется ли димер; если все размоется наверное это не совсем хорошо, могу полосу димера не увидеть

Чем больше масса мономера тем легче увидеть димер. Увидеть вполне реально и на непрерывной буферной системе.
Sheli
IP-штамп: frcw2tNV4HxN2
гость



 прочитанное сообщение 29.04.2010 16:35     Сообщение для модератора       

ценно, спасибо,
мономерчик 24 кДа, не очень-то большой
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 29.04.2010 17:36     Сообщение для модератора       

24кда и 48 кда это вполне разница в 12.5% геле должны хорошо разбегаться
Microbius
IP-штамп: frG/ehwVgdnf.
гость



 прочитанное сообщение 05.05.2010 13:14     Сообщение для модератора       

Уважаемые форумчане!

Подскажите, возможно ли возобновить активность старого, очень старого TEMED путём перегонки для дальнейшего его использования.

Благодарю. :-)
guest: ммм
IP-штамп: frPZdWSNeN.0k
гость



 прочитанное сообщение 05.05.2010 13:46     Сообщение для модератора       

-очень старого TEMED путём перегонки
А вы попропобуйте, скорее да чем нет.
Участник оффлайн! Beonick
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 24.06.2010 00:43     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Всегда делал форез на вестерн без проблем, а тут столкнулся с какой то ерундой. confused.gif Маркер ladder Fermentas разделяется идеально, а сами образцы вообще не разделяются и все кроме маркера выглядит как размазня с разводами и несколькими зубчатыми фронтами, причем эти фронты заметно еще до окраски при самом форезе. Они полупрозрачные но различимые, неокрашенные но их видно за счет другого преломления света, как границу между заполимеризировавшимся гелем и дистилятом. Что это может быть? Все буферы стандартные, мочевину не использую, при приготовлении проб использую только ингибитор протеаз с которым никогда никаких проблем не возникало и Loading buffer с 0,1% БФС, 2% СДС, 100мМ ДТТ, 50 мМ Трис рН6,8, 10% глицерин. Я так понимаю если маркер нормально разделяется значит проблемы с самими пробами или Loading buffer? Или маркер может нормально разделятся а пробы нет при проблемах с буферами или АА?
guest: ммм
IP-штамп: frzbfAE0vSQrM
гость



 прочитанное сообщение 24.06.2010 12:08     Сообщение для модератора       

--Что это может быть?
Соли это могут быть - фосфаты, сульфаты, бораты очень много тритона в пробе и посторонние полимеры заряженные - РНК, гепарин, альгинаты, полиакриловая кислота.

Для начала пробу разбавьте в 3-5 раз и посмотрите, что будет дальше.
Участник оффлайн! Beonick
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 24.06.2010 16:43     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

--Соли это могут быть - фосфаты, сульфаты, бораты очень много тритона в пробе и посторонние полимеры заряженные - РНК, гепарин, альгинаты, полиакриловая кислота.

хм... Подозреваю что это все таки гепарин. Так как разгонял пробы эритроцитов и сыворотки, а туда наверняка давали гепарин когда брали кровь. Попробую разбавить. Как с этим еще можно бороться? Странно, раньше разгонял сыворотку, и сам же когда брал кровь добавлял гепарин - все было найс. Наверное в эти пробы хорошо гепарина ухнули. Но почему тогда белки нормально не разделились, гепарин наверное должен просто давать левый фон и разводы?
Участник оффлайн! Beonick
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 24.06.2010 16:47     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Кстати, кто разгонял кровь - плазму или эритроцитарную фракцию , поделитесь как Вы пробы готовили и сколько наносили чтобы не было перегруза
Участник оффлайн! Dada




 прочитанное сообщение 08.09.2010 23:58     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Скажите, пожалуйста возможные причины "провисания" картинки фореза-т.е. белки в средних лунках идут ниже.

Еще один вопрос, при проявке блотов полоски белков бывают очень четкие, а в следующий раз (при тех же условиях) они размыты. кажется проблема не в переносе и в антителах, а именно в форезе.В чем? Спасибо заранее за ответы
Участник оффлайн! MrDmitry
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 09.09.2010 00:56     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

В общем случае причины неровностей - неровное поле. Причин может быть много - гель неравномерно заполимеризовался (в центре плохо), наоборот сел сильно и по краям между спейсером и гелем образовались зазоры (тогда спейсер нужно подвинуть), просто плохая камера с плохими кривыми электродами и плохим охлаждением. Хорошая импортная камера с полной погрузкой в буфер при аккуратной работе и качественной заливке геля всегда даёт отличную ровную картинку. wink.gif

Стандартизация всегда даёт полную воспроизводимость результатов - относится ко всему - все реактивы, время, ток, температура (и реагентов) даже количество пипетирований при заливке геля, количество образца и буфер для него - всё-всё. Оцените сами чем отличается каждое ваше действие в протоколе в плохом и хорошем случае и Вы найдёте ответ smile.gif

Сообщение было отредактировано MrDmitry - 09.09.2010 01:02
guest: ммм
IP-штамп: fr/pF91fVGwYU
гость



 прочитанное сообщение 09.09.2010 09:54     Сообщение для модератора       

-Скажите, пожалуйста возможные причины "провисания" картинки фореза-т.е. белки в средних лунках идут ниже.

В 90% случаев это результат плохого прилегания боковушек к гелю, как следствие паразитный шунт, по которому течет ток и снижает разность потенциалов в этой области.

--Еще один вопрос, при проявке блотов полоски белков бывают очень четкие, а в следующий раз (при тех же условиях) они размыты.

Чаще всего 2 причины:
1) Гель перед переносом долго лежал(или лежал при более высокой температуре) прежде чем по нему пустили ток в перпендикулярном направлении.
2) Убежал фронт из геля и после этого гнали форез дольше чем обычно.
Участник оффлайн! Nicolai




 прочитанное сообщение 10.09.2010 11:35     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

подскажите есть ли кто на форуме кто занимается анализом гибридности семян (кукурузы, подсолнечника, ячменя ....).
guest: plotter
IP-штамп: frlnAsDr.5x7A
гость



 прочитанное сообщение 01.10.2010 18:05     Сообщение для модератора       

Microbius, вам виальчик темеда почтой переслать? Такие реактивы скупиться это уж вообще...

Beonick, я плазму гонял (скорее от любопытства и наличия свободных треков). Без сильного перегруза получалось если брать примерно 1/5 мкл плазмы на трек. Но красить серебром, т.к. с моим коллоидом (~1.5ng чувствительность) кроме альбумина и глобулинов было мало что видно.

Господа, кто делал 2-D "на коленке", поделитесь секретами. Очень хочется это сделать, но ради праздного любопытства брать камеру за 2k$ как-то... Вот если что интересного найду, тогда уж можно.

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 28.03.24 22:38
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft