Здравствуйте! Помогите, пожалуйста, разобраться с фореграммой. Мы использовали две разные методики выделения РНК, которую потом ставили на форез. Нужно оценить, какая из методик выделяет РНК чище, то есть, где меньше примеми ДНК, которая в дальнейшем может помешать проведению нашей работы. Вот фореграмма, слева направо: маркер от 1,5 kb, образец 1 - метод 1, образец 1 - метод 2, образец 2 - метод 1, образец 2 - метод 2. Есть ли здесь ДНК, и каким полосам соответствуют рибосомальная, матричная и транспортная РНК?

Метод 4 и 2, практически без геномной ДНК.
Метод 3 - очень много геномной ДНК и мало РНК.
Метод 1 также как ив методе 3, содержит много ДНК, но уже больше РНК.

лучший метод это 4, затем 2, затем 1.

тРНК и 5S РНК только у методов 2 и 4, самые нижние две полосы.
Две полосы выше, это рибосомальная РНК.
Самая высокая это ДНК.
Матричная РНК это фон между всеми этими РНК и ДНК.

Спасибо вам большое за помощь!
1 и 3 выделили набором Qiagen mini kit, а 2 и 4 - Рибо-золь-Д. Выходит, что Рибо-золь выделяет более чистую РНК.

http://www.evrogen.com/technologies/RNA-isolation.shtml

А я бы сказал, что геномка есть и в 2 и 4 - она просто намного длиннее, чем в 1 и 3 и сидит в лунках.
А вот для Qiagen видно QIAshredder использовали и порвали геномку на куски по 10kb.

А так - хорошая РНКа, нет деградации. ДНКи очень много в 1 и 3 - просто дофига)

В лунках светится как РНК так и ДНК, которая связана с полисахаридами и не может выйти.

Если геномная ДНК присутствовала в образцах 2 и 4, то мы бы видели высокую полосу как и в образцах 1 и 3, даже в 2% агарозе.

Возможен эффект экранирования ДНК, если количество РНК высокое и весь этидий бромид связан с РНК. Но не в этом случае.

Конечно, в образцах 2 и 4 присутствует ДНК, но ДНК там мало.

Хорошо бы переосадить РНК с LiCl.

к RNK добавить нечего, каждое слово- золото. метод пересаждения литием есть в предыдущей ссылке

Используйте RNeasy mini Kit Plus от Qiagen там ДНК-аза в комплекте, проблема с лишней ДНК решится.

Хорошо бы назвать "мотоды" своими именами (ссылки, названия, киты и т.д.)
1 и 3 - методы для выделения суммарных НК, но с очень большими потерями.

Да методов всего два, насколько я понял. Просто 2 разых образца

Ну да, два на два. Очень интересно чем же методы (не образцы ) отличаются друг от друга - может это не сравнимые "вещи" .

Да, использовали два разных набора реагентов для выделения. "Qiagen mini kit" - выделение РНК на колонках - проводится серия отмывок, а в "Рибо-золь-D" выделение основано на разделении на две фазы - фенольная содержит ДНК и белки, а водная - РНК, ее и отбирают.

Для сравнения методов должно быть еще сравнимое количество исходного материала, из которого выделяется РНК, причем его не должно быть много. При этом ограничение количества будет обусловлено китом от Qiagen (фенольный Рибо-золь все сожрет).

Уточните какой набор Киагена?
если RNeasy mini - то он не должен столько ДНК оставлять - он чистенько выделяет.
Или материала слишком много взяли.

https://wanelo.co/replicarolexwatches
https://musescore.com/fakerolexwatches
https://www.racked.com/users/Replicarolexwatches
https://sketchfab.com/Rolexrelicawatches
http://www.video-bookmark.com/bookmark/433...eplica-watches/
https://www.slideserve.com/ReplicawatchesUK...pt-presentation
https://www.theverge.com/users/Replicarolexwatches
https://www.yumpu.com/en/document/read/6532...lica-watches-uk
https://online.flippingbook.com/view/152275247/
https://www.instapaper.com/p/8767342
https://www.bigblueview.com/users/Replicarolexwatches
https://weheartit.com/watcheshutuk
https://sites.google.com/view/replicarolexwatches24/home
https://www.indiehackers.com/post/hints-on-...atch-113aef73a9
http://replicawatchesuk.esportsify.com/for...ica-rolex-watch

You completed certain reliable points there. I did a search on the subject and found nearly all persons will agree with your blog. Home Inspection

Wow! Such an amazing and helpful post this is. I really really love it. It's so good and so awesome. I am just amazed. I hope that you continue to do your work like this in the future also. Home Inspection

Wow what a Great Information about World Day its exceptionally pleasant educational post. a debt of gratitude is in order for the post. Home Inspection

I'm happy to see the considerable subtle element here!. Home Inspection

A good blog always comes-up with new and exciting information and while reading I have feel that this blog is really have all those quality that qualify a blog to be a one Home Inspection

A good blog always comes-up with new and exciting information and while reading I have feel that this blog is really have all those quality that qualify a blog to be a one Home Inspection

I have read your article, it is very informative and helpful for me.I admire the valuable information you offer in your articles. Thanks for posting it.. Home Inspection

I quite like reading an article that can make people think. Also, thanks for allowing for me to comment! Home Inspection

We are really grateful for your blog post. You will find a lot of approaches after visiting your post. Great work Home Inspection

I surely acquiring more difficulties from each surprisingly more little bit of it Home Inspection

It should be noted that whilst ordering papers for sale at paper writing service, you can get unkind attitude. In case you feel that the bureau is trying to cheat you, don't buy term paper from it. Home Inspection

Lydia