Здравствуйте! Долгое время уже работаю с Hep-2 линией, недавно вернулась из отпуска и разморозила из азота клетки.
И наблюдалась странная картина - перестали расти, странные образования появились около них. Не подскажите, бактерии ли это? Меня они очень смущают

здравствуйте! Я не так давно начала работать с hep-2 культурой клеток. Дело в том, что в последнее время заметила отсутствие роста и странные образования около клеток. Не подскажите,бактерии ли это? если да, то какие?
и как лечить?

Вы их еще жиже сейте, они вообще расти перестанут.
Судя по картинке сложно сказать про зарост - грибов или дрожжей я не вижу (среда, кстати прозрачная?, если да, то бактериального зароста тоже нет). Странные образования около клеток - это дохлые клетки, причем сдохшие довольно давно.
Можете проверить на микоплазму - ее вы просто так не увидите.

вы думаете что тут телепаты тусуются? картинки давайте, и подробности, что поменялось после отпуска (среда, и тп)

извините, у меня вчнра интернет плохо работал. Не загрузились фотографии поэтому.

ну я бы не сказал что тут есть зарост. батерии мелкие и их должно быть много и равномерно в среде.
похоже что клеткам вашим просто плохо. плохо разморозили, плохо суспендировали, да и плотность маленькая. некоторые летки у вас распластаны, а некоторые ошарены, и видимо уже открепились и всплыли. по раститие их еще, попробуйте пересеять на меньшую чашку.
сложно чтото добавить не знаю как вы вообще работаете, не умея нормально работать клети можно легко угробить.
как размораживали клетки? какая плотность? на какой чашке растут?

> не умея нормально работать клети можно легко угробить

ship, ну тут не убавить, не прибавить. Осталось понять кто может научить правильно с ними работать из тех студентов и учоных, которые пробегают бегом через клеточный блок, особо ничем не заморачиваясь.
В поле видно, что клетки потеряли целостность мембран, и скорее всего если и жизнеспособны, то малым своим числом. В помойку всё, размораживайте другую ампулу. Хотя, если морозили в среде без криопротектора там будет то же самое.

Могут они быть дохлыми уже в азоте? Вчера новую партию достала . Среда на глаз прозрачная, а при микроскопии вижу столько грязи ( либо это деформированные дохлые клетки)
а если клетки шевелятся, то это бактерии?

И круглые крупные образования - это точно дохлые клетки? Просто их так много

куда дели предыдущие сообщения?

Не видела других сообщений. Возможно, удалены администратором

"шевеление" бактерий вы врядли увидите в микроскоп.

могут быть дохлыми в азоте если вы не умеете их морозить.

напишите сколько и как морозили, как размораживали, на какую чашку посеяли и тп.

тьфу ты! вы тут еще и две одинаковые темы развели. не удивлен тому, что у вас и клетки дохнут

Заморожена культура была в марте 2016 года по след.схеме:
готовлю след.раствор: 30%-раствор FBS в ДМЭМе + 10% раствора DMSO
После того, как снятые клетки смешиваю с приготовленным раствором, я заливаю в криопробирки их по 1 мл. Дальше заморозка след.образом:

30 в холодильнике
30 мин - в морозилке
30 мин - над парами азота
и далее в азот
Честно говоря, я уже размораживала из этой партии клетки, ничего плохого не было.

Разморозка: достаю из азота 2 криопробирки по 1 мл, размораживаю в водяной бане 37 С (прям окунаю, крышки плотно завинчены), а далее уже клетки смешиваю с ДМЭМ(в нем 10 % FBS) и переношу клетки со средой в маленькие флаконы типа матрац с фильтром объемом 60 мл.
Ну и в СО2 инкубатор

Я не за оскорблениями сюда обратилась

У меня очень тормозил вчера интернет, поэтому мне казалось, что первый раз я тему не создала.

ой ё...

Всю партию в педаль и попросить у коллег живую культуру. У Вас дохлятина, т.к. они неправильно заморожены.
В следующий раз морозим в 100% FBS с 10% DMSO. Пробирку класть в коробочку из пенопласта хотя бы, желательно с толстыми стенками. Свободное просторанство в коробочке можно заложить ватой. Коробочку кладете на -70. На следующий дено - в азот (хотя при желании/лени можно на -70 продержать до пары месяцев, но потом в азот).
Размораживать в водяной бане (RT или 37). Потом открутить, супер в педаль (избавляемся от DMSO) и клетки во фласк.

* После заморозки хорошо бы еще разморозить одну пробирку из партии и посмотреть как клетки выйдут из заморозки. Если все нормально - партия годная, если нет - партию в педаль. При этом желательно вести культуру, чтобы не бегать к коллегам, если плохо заморозили.

Спасибо большое! Попробую так заморозить в след.раз. Я просто переживала, что это зарост. А оказались дохлые клетки, видимо. Но дело в том, что я сейчас разморозила две новых пробирки - растут активнее, хоть и много дохлых. Стоит ли мне просто тогда менять среду, избавляясь от дохлых клеток? Ведь по идее, живые клетки, раз они выжили, должны продолжить расти

лучше найти хорошие клетки и нарастить новые если есть возможность, тк кульутра стандартная.
а пытаться разогнать полудохлые -не лучший вариант, тк у вас там пройдет некая селеция самых дубовых клеток из ампулы, ну и строго говоря они могут после этого поменять свойства.

Таки конечно да, но в принципе, Hep-G2 (как я понимаю, это то, что подразумевается под Hep2) считается самим ATCC как неидентифицируемая культура, и там уже такого населектировалось в разных лабах мира, что ее свойства непонятно с чем сравнивать.
Я б вообще настоятельно советовал уходить от использования этих клеток (к HeLa тоже самое относится).

я вообще вроде гдето видел что Hep2 толи контаминированы HeLa часто, то ли вообще перепутаны HeLa. только вот не помню где.
конечно лучше другие клетки, но тут уж надо знать что они там с ними делают.

слушайте, вашими устами, да только мед хавать.
допустим, нет соседних лабораторий
гораздо интереснее обсудить как быть в условиях когда культура законтаминирована, что делать, если культура неоднородна (дубовые клетки) и как дальше жить.
(и вы действительно с ходу грубите)

ksm, "контаминированная" = "вылезшая из лабораторной мусорки для того, чтобы сделать Вашу работу непубликабельной"

Дубовые клетки - это понятие количественное.

ну это, видимо, интересно тем, то реально не работал и не работает с клеточными культурами.
тк в 99.9% случаев - борьба с онтаминацией - педальное ведро.
с контаминацией можно бороться ну только у вас какие то ультрамега редкие и важные линии, полученные в результате сложнейших манипуляций и повторить их получение(например из биоптатов пациентов), не представлдяется возможным.

к тому же, если вы заметили, то у девушки нет контаминации.

с ходу в педальное ведро - непрофессионально. корифеи сначала автоклавируют

очень ценное замечание, я и не знал, что так бывает.

https://jumpshare.com/v/QxZ9Rn2mfDCaBq2AdBG1
https://www.edocr.com/v/znnrba3z/watcheshut...lica-Watches-UK
https://www.tuugo.us/Companies/best-replica...s/0310006695505
https://topsitenet.com/article/988178-hints...ca-rolex-watch/
http://simp.ly/p/nxGlWb
https://telegra.ph/Hints-on-Choice-of-a-Hig...lex-Watch-02-22
https://replicarolexwatche2.blog.fc2.com/blog-entry-1.html
https://www.knowpia.com/s/blog_60f7e7c31014a97a
https://zenwriting.net/replicawatches24/hin...ica-rolex-watch
https://globalcatalog.com/replicawatchesuk.us/en
http://www.cplusplus.com/articles/iE1wvCM9/
https://eatsleepride.com/c/346210/hints_on_...ica_rolex_watch
https://www.myminifactory.com/users/watcheshutukcom
https://www.mioola.com/ReplicawatchesUK/post/199764/
https://en.gravatar.com/allreplicawatches24
https://8tracks.com/replicawatchesuk

Anyone can connect บาคาร่าออนไลน์ with their audience slot xo through blogging and enjoy 11hilo you who your readers are. สล็อต the myriad benefits that 123GOAL blogging provides

organic traffic from nigoal from the first sentence.ลิงค์รับทรัพย์ search engines promotional พ ริ ต ตี้ เกม มิ่ง content for social media ราคา บอล and recognition from a new Hotgraph audience you haven’t tapped into yet.