Полная версия страницы  English  

очистка РНК на колонках

Serg900, 18.10.2016 14:08
Добрый день, господа!

У меня специфическая потребность выделить бенд РНК 700 пн из геля (после транскрипции In vitro). На авось попробовал на колонках для выделения ДНК из геля, но ничего не выделилось. Может кто даст ссылку на протокол очистки РНК на колонках, че то гугл сходу не помог) А еще, если просто растворить гель с бендом РНК в 100мкл связывающего буфера (NaI 6M?), а потом тупо добавить это дело в 6 мл гибридизационного буфера, как Вы, уважаемые форумчане, думаете сработает такая смесь в нозерне?
ksm, 18.10.2016 14:29
в гибридизационный буфер разве не ссДНК льтют? зачем резать из геля, если РНК предварительно просто разделяют в геле и после этого переносят? ну, вырежите фрагмент мембраны в районе 700 пн
Serg900, 18.10.2016 15:38
Это РНК зонд.
ship, 18.10.2016 18:07
после in vitro транскрипции выделял китом miRNAeasy, думаю для фрагмента 700 можно и RNeasy исползовать. А вы думаете что после транскрипции у вас много разных фрагментов получается? вы это на геле проверяли?
интересно зачем для Нозерна нужен РНК зонд, а не ДНК зонд?
Serg900, 18.10.2016 18:18
(ship @ 18.10.2016 18:07)
Ссылка на исходное сообщение  после in vitro транскрипции выделял китом miRNAeasy, думаю для фрагмента 700 можно и RNeasy исползовать.  А вы думаете что после транскрипции у вас много разных фрагментов получается? вы это на геле проверяли?
интересно зачем для Нозерна нужен РНК зонд, а не ДНК зонд?

Чувствительность РНК зонда на порядок выше ДНК зонда, плюс я могу использовать смысловые зонды как контроль. Да проблема в двойном бенде. ПЦР матрица (с кДНК) содержит еле заметный второй более короткий амплифициремый фрагмент, который в транскрипции дает наряду с основным зондом довольно приличное количество короткого. Я не уверен, что это неспецифика и думал проверить оба бенда как зонды по отдельности..
ship, 18.10.2016 18:23
(Serg900 @ 18.10.2016 16:18)
Ссылка на исходное сообщение  Чувствительность РНК зонда на порядок выше ДНК зонда, плюс я могу использовать смысловые зонды как контроль. Да проблема в двойном бенде. ПЦР матрица (с кДНК) содержит еле заметный второй более короткий амплифициремый фрагмент, который в транскрипции дает наряду с основным зондом довольно приличное количество короткого. Я не уверен, что это неспецифика и думал проверить оба бенда как зонды по отдельности..

ну так может проще вырезать и выделить в чистом виде нужную полосу ПЦР матрицы для транскрипции, нежели чем ломать голову над разделением продууктов ин витро транскрипции?
и делать зонды независимо с ккаждой полосы полосы кДН матрицы?
Serg900, 18.10.2016 18:49
Второго бенда в ПЦР матрице очень мало, можно ненароком зависнуть. Но может придется так делать, если ничего не посоветуют
ksm, 18.10.2016 19:03
GlassMilk и аналоги. AMPure не знаю, как с иодидом... возможно G-25 микроколонки. я бы сначала попробовал как вы писали, залить все в гибридизационный буфер.
у вас много РНК кстати?
Serg900, 18.10.2016 21:15
Да, зонда хватает, а для гибридизации надо совсем немного. Наверно, все таки попробую с буфером для растворения геля. Он кстати вроде из гуанидина.
Serg900, 26.10.2016 17:37
Делюсь результатом. Зонд, вырезанный из геля и растворённый в гуанидине работает.
nigoal123, 19.05.2022 06:44
Anyone can connect บาคาร่าออนไลน์ with their audience slot xo through blogging and enjoy 11hilo you who your readers are. สล็อต the myriad benefits that 123GOAL blogging provides

organic traffic from nigoal from the first sentence.ลิงค์รับทรัพย์ search engines promotional พ ริ ต ตี้ เกม มิ่ง content for social media ราคา บอล and recognition from a new Hotgraph audience you haven’t tapped into yet.
Guest, 19.05.2022 10:45
For the past 15 years, India Pggame123 and China have vied 88ktc for favourable diplomatic สล็อต123 and trade relations 123bets with Sri Lanka thanks 11hilo to its strategic location in the Indian หวยปิงปอง ocean. While popular perception สล็อต123 indicated China had outpaced India, the 123VEGA recent economic and Dreamgaming political turmoil in Sri Lanka seems to ปั่นสล็อต have given India's foreign policy.
Это — лёгкая версия форума. Чтобы попасть на полную, щелкните здесь.
Invision Power Board © 2001-2024 Invision Power Services, Inc.