Полная версия страницы  English  

Трис-фосфатный буфер

metrim, 04.12.2016 18:32
Нашлось куча реаналовских баночек с трис-фосфатной смесью. Так понимаю - для электрофореза.
В баночках, судя по звуку (они запаяны) - сыпучее, не слежавшееся вконец.
Ни в каких методиках не встречал, что бы использовался таковой.
Можно ли его использовать вместо трис-хлор буфера?
MMM, 04.12.2016 20:26
Для агарозного фореза НК.
metrim, 04.12.2016 21:06
(MMM @ 04.12.2016 21:26)
Ссылка на исходное сообщение  Для агарозного фореза НК.
Туда просто надо ввести ЭДТА как в ТАЕ и делать все как обычно при разгонке горизонтального фореза ?
Молярность по трису использовать как в ТАЕ ?
-Ъ-, 05.12.2016 09:56
(MMM @ 04.12.2016 21:26)
Ссылка на исходное сообщение  Для агарозного фореза НК.

Сомневаюсь... Качество полос должно быть хуже.
Mykhaylo, 05.12.2016 11:28
Баночки желтые, фирмы Реанал 80-90х годов ? smile.gif У нас тоже их полно в подвале. Использовать для фореза его проблематично да же если мешать с Трис-ОН - уже проще сделать нормальный ТБЕ, ТАЕ. А щелочью довести до нормы и тем более не получится - ток в буфере будет адский.
MMM, 05.12.2016 12:23
TPE
трис-фосфатный буфер для агарозного электрофореза
рабочий раствор:
89мМ Трис-фосфат рН=8,5
1мМ ЭДТА
<C> Маниатис
genseq, 05.12.2016 13:16
Фосфат неплохо буферит и без Триса. wink.gif

10 мМ Na2HPO4 (pH 8,6...8,8).

<C> genseq
Mykhaylo, 06.12.2016 11:23
(MMM @ 05.12.2016 11:23)
Ссылка на исходное сообщение  TPE
трис-фосфатный буфер для агарозного электрофореза
рабочий раствор:
89мМ Трис-фосфат рН=8,5
1мМ ЭДТА
<C> Маниатис


Вот только реаналовский при разведении кислятина на уровне 5-6, если меня память не подводит. И чтобы сделать 8,5 нужно крохи фостатного триса добавлять к основному. Вопрос - зачем такая морока, если борат много лучше в конечном результате.
metrim, 06.12.2016 11:42
Ну про TPE и его рецептуру я понятное дело нашел smile.gif и то что фосфатный буфер работает - тоже подозревал smile.gif)

Вопрос то в ПРИМЕНИМОСТИ, для чего его адекватно использовать, как он по сравнению с ТАЕ или трис-боратным.
Можно ли заменить трис-фосфатом трис-хлор в акиламидном белковом форезе?
MMM, 06.12.2016 11:54
--Вот только реаналовский при разведении кислятина на уровне 5-6
Но тогда у него нет практически никаких оснований называться буфером.
-- как он по сравнению с ТАЕ или трис-боратным.
Проще проверить самому, чем получить вразумительный ответ на форуме.
---Можно ли заменить трис-фосфатом трис-хлор в акиламидном белковом форезе?
Нельзя, но вы можете в этом убедиться на собтвенном опыте.
Mykhaylo, 06.12.2016 13:16
(MMM @ 06.12.2016 10:54)
Но тогда у него нет практически никаких оснований называться буфером..

Это с какой радости? smile.gif Естественно что чистый трис-фосфат не есть буффер а один из 2х компонентов. Трис -НСL тоже при разведении в воде около 5, а то и ниже (лень лезть смотреть). Его же нужно "щелочью" до ума довести и тогда он становится буфером.
MMM, 06.12.2016 13:46
Чистый трис основание в растворе дает рН порядка 10,5 -11,2, Трис -солянокислый имеет рН порядка 4-5. НО! Буферные растворы на основе триса почему-то используют в диапазоне примерно от 7 до 9.

Максимальная буферная емкость раствора достигается при pH=pKa, а в областях рН<pKa-1 и pH>pKa+1 буферная емкость резко снижается.

Область рН 5-6 слишком далеко отстоит от pKa, как триса(pKa=8) так и фосфата(pKa=6,9-7,2), что бы трис-фосфатный буфер обладал серьезной буферной емкостью в этой области.
Mykhaylo, 06.12.2016 14:01
(MMM @ 06.12.2016 12:46)
Ссылка на исходное сообщение  Чистый трис основание в растворе дает рН порядка 10,5 -11,2, Трис -солянокислый имеет рН порядка 4-5. НО! Буферные растворы на основе триса почему-то используют в диапазоне примерно от 7 до 9.

Максимальная буферная емкость раствора достигается при pH=pKa, а в областях рН<pKa-1 и pH>pKa+1 буферная емкость резко снижается.

  Область рН 5-6 слишком далеко отстоит от pKa, как триса(pKa=8) так и фосфата(pKa=6,9-7,2), что бы трис-фосфатный буфер обладал серьезной буферной емкостью в этой области.


И к чему это все? Я прекрасно помню как подбираются буфера smile.gif

Еще раз и медленно: я сказал вещество трис-фосфат при разведении имееет такой же кислый рН (5 и ниже, не буду я его разводить и мерять), так же как и трис-солянокислый и при смешивании с трис-основой дает именно буфер 7-9 (как намешаете).

Просто никто (я так точно) и не называл трис-фосфат (вещество, а не смешаный буфер) буфером чтобы, утверждать: "Но тогда у него нет практически никаких оснований называться буфером".
MMM, 06.12.2016 14:13
--И к чему это все?

Могу лишь повторить то, что уже сказал.
--Вот только реаналовский при разведении кислятина на уровне 5-6
Но тогда у него нет практически никаких оснований называться буфером.

Это не буфер. Это вещество, из которого можно сделать буфер.

Точно так же как трис(основание) - не буфер и трис солянокислый - не буфер и ацетат натрия не буфер и уксусная кислота не буфер. Но из всех этих веществ можно сделать буферные растворы путем взаимодействия с тем или иным веществом.

А вот таблетки PBS - это буфер из них буферный раствор получается добавлением воды(растворителя) без привлечения дополнительных веществ.
Mykhaylo, 06.12.2016 14:21
Явно без бутылки не разберемся

Вот объясните, чем же вещество трис -фосфат отличается от веществатрис-хлорида при приготовлении буффера при смешивании с трис-основой smile.gif

Ведь вещество трис-солянокислый тоже уходит в жуткую кислятину сам по себе, но он годится для приготовления , а трис-фосфат - вдруг нет (в желтых баночках Реанала именно вещество, а не сухой буфер "в таблеточках").
MMM, 06.12.2016 16:02
-- а трис-фосфат - вдруг нет
Как это нет? Для приготовления годится, при чем необязательно с трис основанием. И ничем не отличаются(в отношении буфер/не буфер) солянокислый трис такой же не буфер, как и трис фосфорнокислый.

Но сами то они конечно отличаются друг от друга. Например у фосфорнокислого интервал рН с большой буферной емкостью на единицу шире. Или солянокислый будет давать осадки с растворимыми солями серебра, а с солями щелочноземельных металлов не будет, в отличии скажем от фосфорнокислого, который будет давать осадки с солями щелочноземельных ме5таллов.
metrim, 07.12.2016 12:50
Хммм, странно.
Я для прбы кажись разводил дно молярный трис-фосфат из баночки, которая у меня. И, может что то путаю - рН там выше 7 был определенно, не 5 - точно.

Ну т.е. ТРЕ - для нуклеинок судя по всему, для белка сказали - не подходит?
nigoal123, 19.05.2022 06:48
Anyone can connect บาคาร่าออนไลน์ with their audience slot xo through blogging and enjoy 11hilo you who your readers are. สล็อต the myriad benefits that 123GOAL blogging provides

organic traffic from nigoal from the first sentence.ลิงค์รับทรัพย์ search engines promotional พ ริ ต ตี้ เกม มิ่ง content for social media ราคา บอล and recognition from a new Hotgraph audience you haven’t tapped into yet.
Это — лёгкая версия форума. Чтобы попасть на полную, щелкните здесь.
Invision Power Board © 2001-2024 Invision Power Services, Inc.