Полная версия страницы  English  

ДНК-гибридизация и радиоактивная метка

vb, 12.12.2016 19:02
тут вдруг упала методика ДНК-гибридизации. надобно освоить и использовать.
пугает, что методика с радиоактивной меткой.
правильно ли я понимаю ситуацию, что если у нас нет этой кухни (радиоактивной), то лучше туда и не лезть?
что выбрать в качестве альтернативы?
на ум приходит биотиновая метка с авидин-ферментным коньюгатом (щелочная фосфатаза?), флюресцентная метка (пока не знаю что выбрать). нужно дешево, сердито и желательно с минимальными затратами на оборудование.
MMM, 12.12.2016 20:45
Биотиновая метка и стрептавидин пероксидаза, а потом ECL(хемилюминесценция). А с изотопом в России, у вас и не получится, говорят им только в ИБХе и можно пользоваться.
dk, 12.12.2016 21:29
Да, в ИБХ "кухня" налажена. Но не факт, что заинтересуете народ. Но в любом случае "быстро, дёшево и качественно" не получится.
LMP, 12.12.2016 23:36
Может DNA-DIG?
http://www.sigmaaldrich.com/catalog/produc...ng=en®ion=RU
Это будет по-лучше радиоактивной метки smile.gif
vb, 13.12.2016 16:54
Спасибо всем.
Pharmaсol, 14.12.2016 01:22
DIG потом "визуализировать" еще надо, может проще сразу флуоресцентной Алексой, типа этой https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/U21650
Да и дешевле, наверняка, чем Сигма.
NMR-guy, 14.12.2016 06:09
Радиацию в Вашем корпусе Вам никто делать (и покупать) законно не даст (хотя, я знаю, что вы ее там у себя все равно по-тихому делали лет 20 назад). Это должно быть отдельно стоящее или физически изолированное по всем коммуникациям здание с ПОСТОЯННО действующим дозиметрическим шлюзом и еще куча других обязательных норм, которые, если не заложены в проект строительства, выполнить нереально потом.

Все зависит от того, накой она вам нужна стала опять. Если - количественный пикомолярный анализ или детекция следов чего-то (в том числе - блотом) с последующим наложением на микросрезы, то никакая флуоресценция, не говоря про антитела со стрептавидином (качество которых и афинность к мишени плавает от партии к партии и при хранении), по чувствительности и линейности вам ее не заменит. Договаривайтесь с ИБХ, если сможете их чем-то заинтересовать (выше правильно советуют).

Если это макро-исследования всяких экспериментальных биоптатов на предмет "качественно сказать где оно осело" - то тут флуоресцентные метки, зонды конъюгаты квантовых точек и прочее модное и красивое даже лучше подойдет, поскольку работать проще и отходы можно выливать в раковину.
LMP, 14.12.2016 11:41
(Pharmaсol @ 13.12.2016 23:22)
Ссылка на исходное сообщение  DIG потом "визуализировать" еще надо, может проще сразу флуоресцентной Алексой, типа этой  https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/U21650Да и дешевле, наверняка, чем Сигма.

да. конечно, есть антитела к DIG с пероксидазой. В своё время закупал всю систему у Бёрингера (кто уж его поглотил потом не помню). А Сигму привёл просто для для описания метода.
MMM, 14.12.2016 12:49
--да. конечно, есть антитела к DIG с пероксидазой. В своё время закупал всю систему у Бёрингера
Когда это было, Когда это было..........во сне, наяву ......
-- (кто уж его поглотил потом не помню).
Это Рош, Это Рош, Рош,Рош Рош.......

В общем диговая система раза в три четыре дороже биотиновой, но если у вас двойная окраска на FISH, то куда вы денетесь с подводной лодки. Кроме, того ДИГ дает меньше фона.

--DIG потом "визуализировать" еще надо, может проще сразу флуоресцентной Алексой, типа этой https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/U21650
Да и дешевле, наверняка, чем Сигма.


Очень вряд ли дешевле.
Алексу что визуализировать не надо? Единственный достойный агрегат для визуализации Алексы на мембране - это Typhoon 9500. Потому что там лазеры светят и интерференционные фильтры стоят на отсечке. если вы думаете, что вы посветите на мембрану синим(да и любым др. транслюмом) и увидите Алексу то вы ооочень глубоко заблуждаетесь.

Визуализировать пероксидазу дешевле не придумаешь люминол и гидроксикоричная кислота + аптечная перекись рентгеновская пленка и проявитель.

Но если у вас в кладовке лаборатории вместо рентгеновского проявителя завалялось парочка тайфунов, то можно и Алексой
LMP, 14.12.2016 13:40
(MMM @ 14.12.2016 10:49)
Ссылка на исходное сообщение  Визуализировать пероксидазу дешевле не придумаешь люминол и  гидроксикоричная кислота + аптечная перекись рентгеновская пленка и проявитель
+++
только пленку не любую, а с чувствительностью не менее 300ор; (300 - 500) норм.
MMM, 14.12.2016 14:38
Ну, естественно пленка должна быть медицинская, а не для дефектоскопии металлов.
R.J.Dio, 14.12.2016 16:03
(dk @ 12.12.2016 22:29)
Ссылка на исходное сообщение  Да, в ИБХ "кухня" налажена. Но не факт, что заинтересуете народ. Но в любом случае "быстро, дёшево и качественно" не получится.

не дай Вам Б-г попробовать эту "налаженную" кухню, с такой голимой меткой, как нынешняя. Руки бы поотрывать!
vb, 14.12.2016 16:17
(NMR-guy @ 14.12.2016 04:09)
Ссылка на исходное сообщение  Радиацию в Вашем корпусе Вам никто делать (и покупать) законно не даст (хотя, я знаю, что вы ее там у себя все равно по-тихому делали лет 20 назад). Это должно быть отдельно стоящее или физически изолированное по всем коммуникациям здание с ПОСТОЯННО действующим дозиметрическим шлюзом и еще куча других обязательных норм, которые, если не заложены в проект строительства, выполнить нереально потом.

Все зависит от того, накой она вам нужна стала опять. Если - количественный пикомолярный анализ или детекция следов чего-то (в том числе - блотом) с последующим наложением на микросрезы, то никакая флуоресценция, не говоря про антитела со стрептавидином (качество которых и афинность к мишени плавает от партии к партии и при хранении), по чувствительности и линейности вам ее не заменит. Договаривайтесь с ИБХ, если сможете их чем-то заинтересовать (выше правильно советуют).

Если это макро-исследования всяких экспериментальных биоптатов на предмет "качественно сказать где оно осело" - то тут флуоресцентные метки, зонды  конъюгаты квантовых точек и прочее модное и красивое даже лучше подойдет, поскольку работать проще и отходы можно выливать в раковину.

это про что вообще?
kb1, 14.12.2016 18:54
(vb @ 14.12.2016 17:17)
Ссылка на исходное сообщение  это про что вообще?

ну, какой вопрос - такой ответ. Видимо, это про "свалившуюся методику, которую надо..".
Не понятно, Вы что хотите? Если освоить работу с радиоактивной меткой, тогда обращайтесь туда где с ней работают (в ИБХ например). Если стоит конкретная научная задача, то попробуйте корректно ее сформулировать
vb, 15.12.2016 03:24
(kb1 @ 14.12.2016 16:54)
Ссылка на исходное сообщение  ну, какой вопрос - такой ответ. Видимо, это про "свалившуюся методику, которую надо..".
Не понятно, Вы что хотите? Если освоить работу с радиоактивной меткой, тогда обращайтесь туда где с ней работают (в ИБХ например). Если стоит конкретная научная задача, то попробуйте корректно ее сформулировать

Если 4 человека поняли о чем речь и ответили, а один не понял и ему нужно какую-то ^конкрентную научную задачу^, то боюсь, дело не в моей формулировке.
Я вообще не понял пассажи про корпуаса и где я 20 лет назад работал с меткой.
Научных задач у меня вообще нет. От сохи мы.
NMR-guy, 15.12.2016 04:15
Всё Вы поняли. Но в Вашем подвале работать с радиацией оффициально никогда было нельзя. И сейчас нельзя.
Aadvark, 24.12.2016 23:03
Покупайте набор North2South, чувствительность на уровне радиоактивного мечения, проба биотинилированная может вечно храниться в -20С.
https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/17097
Работать просто. Избегаете всех трудностей, связанных с радиоизотопами

Удачи,
vb, 25.12.2016 09:59
Спасибо
nigoal123, 19.05.2022 06:49
Anyone can connect บาคาร่าออนไลน์ with their audience slot xo through blogging and enjoy 11hilo you who your readers are. สล็อต the myriad benefits that 123GOAL blogging provides

organic traffic from nigoal from the first sentence.ลิงค์รับทรัพย์ search engines promotional พ ริ ต ตี้ เกม มิ่ง content for social media ราคา บอล and recognition from a new Hotgraph audience you haven’t tapped into yet.
Это — лёгкая версия форума. Чтобы попасть на полную, щелкните здесь.
Invision Power Board © 2001-2024 Invision Power Services, Inc.