Уважаемые коллеги! Подскажите пожалуйста, для получения СХО в культуре лимфоцитов человека БУДР нужно добавлять через 48 ч культивирования или раньше или позже? И какая концентрация БУДР на 1мл среды? Спасибо

BrdU мы добавляем сразу в концентрации 3 мкг/мл. Культивируем лимфоциты периферической крови 48 часов, дифференциальная окраска хроматид - для того, чтобы в анализировать только метафазы 1 деления.
Если задача стоит подсчет СХО, то культивировать нужно дольше, а BrdU, думаю, что добавлять раза в 1,5-2 побольше.

Спасибо за информацию. Спросила про время добавления БУДР потому что, в методике написано : "Если время удвоения клеток известно, выдерживайте их на питательной среде до фазы экспоненциального роста, а затем добавьте в среду БУДР." Поскольку клетки должны расти в присутствии БУДР на протяжении двух циклов репликации ДНК, то хотелось бы узнать сведения о продолжительности (время)митотического цикла .Прошу прощения за назойливость,но я не работала с кровью человека и только начала отрабатывать эту методику. Огромное ,человеческое спасибо.

Для учета СХО лимфоциты культивируют, по-моему, 72 часа. В 72-часовой культуре вторых митозов должно быть достаточно для анализа.

Большое спасибо.Значит БУДР добавлять сразу. Или всетаки за сутки до конца культивирования? ДА,ЗАБЫЛА СКАЗАТЬ ,очень красивый снимок!

Сразу.

спасибо.Можно еще вопросик? Чтобы получить хороший разброс хромосом в метафазных пластинках, чем вы пользуетесь? Я-пастеровской пипеткой. Както мне не очень нравится.

Можно ознакомиться со статьей:
Cytometry A. 2003 Jan;51(1):46-51.
A new method for improving metaphase chromosome spreading.
Deng W, Tsao SW, Lucas JN, Leung CS, Cheung AL.


А так: методы приготовления препаратов метафазных хромосом часто напоминают шаманские пляски с бубнами, не поймешь, где здравый смысл, а где - ритуал.

СПАСИБО!

Подскажите, пожалуйста, где можно поискать методы культивирования костного мозга для онкогемат. цитогенетики? именно мозгов!!!

Насчет СХО. Рекомендуют для задержки клеток на стадии ранней прометафазы за 6 часов до фиксации добавлять бромистый этидий.

Спасибо. Подскажите пожалуйста . Для культивирования крысиных лимфоцитов действительно лучше применять сыворотку крыс DA и какое количество? Культивировала с сывороткой нов. телят, чтото не пошло.

Скажите пожалуйста объязательно рекомендуется разброс клеток и для изучения СХО у растений
На давленных препаратах это сделать нельзя
Спасибо

Для изучения СХО у растений препараты можно красить Шиффом

Спасибо