Мы определяли содержание интерлейкина с помощью ELISA. Получилось, что оптическая плотность стандартов у нас в два раза ниже, чем в примере приведенном в инструкции. Это очень плохо? Это может быть связано с тем, что мы опустошали лунки, просто переворачивая планшет над раковиной? Если так делать нельзя, то как правильно удалять растворы из лунок?

Прошу прощения за простоту вопроса... К сожалению это такие вещи о которых не пишут в статьях smile.gif но они иногда могут быть чудовищно важны...

Заранее спасибо!

не знаю, я тоже вытряхиваю содержимое планшета в раковину. и более того, промываю его вместо pbs с твином водой из под крана же. и ничего, правда, я elisa на иммуноглобулины делаю. а на счет оптической плотности - подожите подольше, прежде чем останавливать, и бует od повыше

Вакуум-Атсос- рулитЪ

Не поделитесь какой ИЛ и китом какого производителя определяете?

А насос удаляет жидкость до конца? ОНИ в инструкции пишут что это чертовски важно...

R&D Systems, rat IL-6 Quantikine ELISA kit

Нормально, а он не просрочен?

отсасывать и отмывать лучше все таки в штатном вошере.

А вообще то напрситесь в гости к тем, кто постоянно ИФА делает, со своими пробами и своим набором, и вместе сделайте. Лучше один раз увидеть, чем сто раз услышать.

Да нет, не просрочен...

А что такое штатный вошер?

Ну штатный это вообщем то означет обычный прикладывающийсчя к данной системе ИФА : ридер, вошер.

Не хочу обидеть, но в этом нет ничего зазорного,. если вы только соприкоснулисль с ЭЛИЗОй Вошер это такой прибор который отсасываеть промывает и осушает в атоматическом режиме планшеты (стрипы иде проводиться ИФА.
Причем учтите. что еще масса проблем с температурой инкубации. встряхиванием (штатгный шейкер!!!

кстати здесь как то очень долго "спецы" обсуждали вопрос о "краевом эффекте" - то что уже лет 20- 25 назад решено было. Почитацйте документы "Nunk"a

И вообще контроль качества, воспровизводимости и т.д. и т.п. при постанове ИФА - это отдельная песня.

Поэтому и сомнения всегда берут, когд читаешь публикации типа " О роли ИЛ-(1,2,3,4,5,6.....28) в нейропротекции, нейродегенерации у экспериментальных животных."

В процессе возник новый вопрос...

Не знаете ли Вы, можно ли увеличить время инкубации проб для лучшего связывания белка на антителахб например в течение ночи вместо 2х часов прописанных в инструкции? Речь идет о первой инкубации, когда как я понимаю белок связывается с антителами на дне лунок. Как Вы думаете, улучшит ли это результаты, или даст большее неспецифическое связывание?

Проблема в том, что концентрация белка в пробах находится близко к нижнему порогу детекции... а более чувствительных китов я не нашла...

Можно и на ночь оставить при +4.