permeabilisation - chto eto za zverj?

zachem eto nado delatj v metode immunofleorescence?
Chto izmenit variacija vremenem etogo parametra?
Ja eto delaju: Saponinom v techenii 5 minut.

это для того, чтобы сделать мембрану клетки проницаемой для Ваших АТ, поскольку если белки не на поверхности клетки, а внутри, то они будут недоступны для АТ, ну меня так учили

boljshoe spasibo za otvet..

A mojet vi esche znaete zachem inogda v etom processe (posle Saponina) ispoljzujut aceton? (5min at -20C) ??

Vse govorjat chto ego mojno ispoljzovatj, a mojno i net... a chto on menjaet/uluchshaet?

Для фиксации белков и удаления мембраны.
А вот зачем перед ацетоном сапонин добавлять.
Наверное сапонина много. Сапонин перед ацетоном или метанолом ненужная процедура. Сапонин используют при фиксации параформальдегидом, хотя Тритон Х 100 на мой взгляд технологичнее.

Кстати, а как по-русски надо говорить permeabilisation?
В российских статьях встречаю как добуквенный аналог "пермеАбилизация", который я просто не навижу. На худой случай пусть бы писали "пермебилизация". А вы как думаете?

Блин 3 раз пишу и все пропадает...
1. Не разрушение мембраы а делание в ней пор, дырок , колодцев...
аналог гидитонин.... Не обязательно после только формальдегидом ацетон тоже пойдет механизм образования дырок в кратце тут...
http://molbiol.ru/ubb/ultimatebb.php?ubb=g...ic;f=1;t=006178
Для себя я перевожу как дыркоделание....

[Текст переведён с транслита]

Насколько я помню дипломы ребят Надеждинской группы в ацетон сносит всю мембрану. Как и метанол. Метанол, кстати мягче. Вот зачем дырки маленькие в мембране делать, если затем вся мембрана будет удалена не знаю.
И дигитонин, конечно.

Мне кажется, что эту тему пора переносить в раздел биология.

Вадим, я тоже был уверен, что ацетон напрочь сносит всю мембрану, до тех пор пока не попробовал обработать фиксированные ацетоном клетки 0,1% тритоном-PBS. Интенсивность последующего мечения заметно улучшилась.

Ну так, ацетон кроме того, что сносит мембрану, но и очень мощно осаждает белки. Фосфатным буфером с Тритоном ты немного подрастворяешь белки и увеличиваешь доступность эпитопов.
Например, после ацетона и метанола актин не краситься меченным фаллоидином. Актинсвязывающие белки мешают.
Вообще добавление тритона в раствор антител снижает фон.

kak mne skazali: dlja nekotorix Ab nujna obrabotka acetonom dlja drugix net. Poetomu u nas pol laboratorii poljzuetsja, a drugaja net. Na vopros kak uznatj nado-li tvoim Ab aceton - otvetili eksperimentaljno..

Вообще-то термин- "пермеабилизация"- давно "законен".
Означает- "продыраявливание" клеточной мембраны без ее разрушения
При иммунофлуоресцентных методах ( как в микроскопии, так и в проточной цитометрии)- сие нужно, что б, например, внутриклеточные белки каки-нибудь поймать (каспазки, цитокинв в ЭПР и т.д.).

Это- не параметр, а прооцесс.
Измененине времени (например- инкубации клеток в пермеабилизующем буфере)- повлияет на целостность клеток ( передержишь- и кирдык )

Сапонин - распространенный "стафф" (сам его пользую)- стандартный NIH-овский протокол для человеческих мононуклеаров (юзаю для внутриклеточной "отловли" цитокинов и белков апоптотического каскада).

P.S. О кнопке "Транслит" забыли?

Смотря, для каких кеток и для какого метода
Для FACSa (человечьи клетки) - фиксация 2% формалином+ сапониновая пермеабилизация-самое оно.