Тема актуальна для всех культуральщиков, поэтому все мысли, вопросы, обмен опытом здесь - в отдельном топике

разговор начался здесь -

http://celltranspl.ru/forum/viewtopic.php?t=567

начнём с детекции -

раститу вы значит свои любимые клетки в которых уверены на все 100 и уже неоднократно растили и тут бац -

- остановка (или значительное замедление) роста культуры по непонятным причинам (уверены что среда и сапплементы - ok)

- появлентие трупных тел клеток

- аггрегация клеток и образование конгломератов

- адгезивные клетки не прикрепляются к пластику

- при этом нет видимых признаков контаминации бактериями или грибами (внещний вид которой вы прекрасно знаете)



после этого у вас должно возникнуть подозрение на контаминацию микоплазмой, а потом

берете любой кит (их сейчас много коммерческих продаётся) и делаете доставерный тест



при киту кое-что есть здесь -

http://www.cbio.ru/v5/modules/news/article.php?storyid=990



дальше эрадикация

На примере фибробластов - видел сам эту микоплазму.

Признаки такие:

- замедление пролиферации

- в среде появляются "мусор" - обломки сдохших клеток

- контуры клеток становятся неровными, "изрытыми"

- в цитоплазме при большом увеличении (х400 и более, фазовый контраст) видны мелкие черные точки.

- вокруг клетки появляются характерные наросты - "борода".

Вводим клетки в брюшную полость мышки и несколько раз пассируем через несколько мышей, пока микоплазма не перестает детектироваться - дешево и надежно, главное чтобы кл выжили в.б. у мышки. Клеточные линии "устаканившиеся" , гибридомы - хорошо растут, а вот вновь выделенные -не всегда, пробовать надо,в идеале лучше безтимусные, нюде мыши, но они дорогие и содержать хлопотно.

2ASP

Это значит, что нормальной инвитровой методики нет?

Гарантированной нет. Мыши не для всех линий. Можно пребирать кучу антибиотиков и смотреть кто раньше сдохнет клетки или микоплазма. Чаще дохнут клетки.

Смотрите ответ Сергея. Полностью с ним согласен - пробовать надо.



И еще, при последующем клиническом применении клеток, пассирование через мышей вызывает некоторую настороженность....



С другой стороны, в протоколах до- и клинических испытаний может быть должна быть норма, что клетки тестировали перед введением на микоплазму???

Конечно, во всех нормальных протоколах клетки тестируются на микоплазму (чаще на hominis) методом ПЦР. Плюс использование сертифицированной сыворотки.

Конечно, во всех нормальных странах....

А че-то затевать с лечением микоплазмы (!) в клетках для клинического (!) применения - это ересь и бред. Фтопку!

Практически на сегодняшний день это может быть и так, а теоретически -

ассигнациями печки топить...

выкинуть всё, мыться и жечь!

выкинуть всё, мыться и жечь!



выкинуть всё, мыться и жечь!



выкинуть всё, мыться и жечь!

А откуда вообще в культуре клеток микоплазма берется, среды и пластик чаще всего стерильные, сыворотка сертифицированна, в ламинаре фильтры всего пять лет назад мыли и меняли?

Откуда микоплазма-то берется?

Я это к тому, что когда тестировать надо клетки?



И еще, а чем страшна для человека микоплазменная инфекция?

Какой процент населения контаминирован микоплазмой?

Что приводит к активации и развитию активной микоплазменной инфекции (болезни) - иммуносупрессия при клеточной трансплантации? аллоимунизация? психоэмоциональный стресс?

Варианты:

1. Вы размораживаете древнюю контаминированную линию (штамм и т.п.).

2. Вы готовите первичную культуру клеток из тканей, зараженных микоплазмой

3. Вы используете сыворотку с неясной этиологией, на поверку оказывающейся контаминированной (такое в наше время тоже случается).



Метод ПЦР очень чувствителен, поэтому тестируйте когда появятся подозрения.



Бесплодие, невынашивание беременности. Насчет % - это я точно не знаю, наверное, около 10. Как правило, микоплазменная инфекция не имеет яркой клиническиой картины. Иммуносупрессия, конечно, на руку любому инфекционному процессу. А вообще советую набрать "микоплазменная инфекция" в yandex и почитать.

[quote="picarus"][quote="ASP"]



..... А вообще советую набрать "микоплазменная инфекция" в yandex и почитать.[/quote]



Я как и обещал общим знакомым, активным стану после 28 октября.



Видите ли уважаемый г-н Picarus, в нашем сообществе посылать человека в Яндекс, все равно что послать его на х..й.!



Но я не из обидчивых.



Когда то один профессор сказал моему знакомому - не читайте советских газет. Я тоже не рекомендую читать российские сайты, сразу в яхоо, гугль, пабмед. Некоторые слушаются..., до поры до времени..... потом уходят лекарствами торговать...



Что касается микоплазмы, что то я не слышал в Ренесанс- отеле, что Банках тестируют пуповинку на микоплазму. У нас каждый рабочий день идет трансплантация - смотрим все Вич. Гепатит, сифилис, но микоплазму -нет. И клинических проблем связанных с инфекицированностью трансплантанта или реципиента микоплазмой нет, хотя иммуносуппрессируем во всю.



Надо разделить проблему- одно дело культуральный ресерч, и здесь важнейшим являетьяс стоимость твоей культуры - прямая , опосредованная, перспективная нужно спасать клетки или нет.

И другое дело клиниеская трасплантация клеток, ткней и органов - здесь не до жиру, при этом клиническая проблема микоплазменной инфекции в трасплантологии абсолютна не значима!





что касается -мыться и ф топку - зачем постить проблемы. для которых у вас уже есть простые ответы ?



Тем не менее я дал задание одному будущему лауреату нобелевской премии подгогтовить краткий обзор по теме " Проблема микоплазменной контаминации донорскиких клеток, тканей и органов в трансплантолгии". Как будет готово передам на Ваше рассмотрение.



Что касается диагностики микоплазменной инфекции, особ. в г. Москве, сли интересно могу поделиться. Ктати высокая чувствительность ПЦР, никакого отношения к эффективности подтверждения микоплазменной этиологи перечисленных страшных болезней не имеет.

[quote]

Что касается микоплазмы, что то я не слышал в Ренесанс- отеле, что Банках тестируют пуповинку на микоплазму. У нас каждый рабочий день идет трансплантация - смотрим все Вич. Гепатит, сифилис, но микоплазму -нет. И клинических проблем связанных с инфекицированностью трансплантанта или реципиента микоплазмой нет[/quote]



согласно Приказу Минздрава РФ "О развитии клеточных технологий в РФ" от 25 июля 2003 г. N 325

http://stem-cells.ru/const/index.html?disp=notfull&id=10.15

микоплазма не входит в список инфекционных агентов, которые должны быть тестированы в образце пуповинной крови перед закладкой в банк



согласен, клинической проблемы нет, зачем тестировать?

это актуально только для культуры клеток



[quote]что касается -мыться и ф топку - зачем постить проблемы. для которых у вас уже есть простые ответы ? [/quote]



постилось в основном для обмена опытом по диагностике - что важно и актуально, а по поводу эрадикации - общемировая позиция большинства культуральщиков - выкинуть заражённую культуру и помыть лабу

можно конечно играться с антимикоплазменными антибиотиками или коммерческими "химиокиллерами", но я пока не знаю ктобы был счастлив после таких попыток... напротив эффективных средств на 100% нет, а вот вывести антибиотико-резистентного мутанта в лабе, ещё более "злого" - это легко

[quote="Alex"][quote]

Что касается микоплазмы, что то я не слышал в Ренесанс- отеле, что Банках тестируют пуповинку на микоплазму. У нас каждый рабочий день идет трансплантация - смотрим все Вич. Гепатит, сифилис, но микоплазму -нет. И клинических проблем связанных с инфекицированностью трансплантанта или реципиента микоплазмой нет[/quote]



согласно Приказу Минздрава РФ "О развитии клеточных технологий в РФ" от 25 июля 2003 г. N 325

http://stem-cells.ru/const/index.html?disp=notfull&id=10.15

микоплазма не входит в список инфекционных агентов, которые должны быть тестированы в образце пуповинной крови перед закладкой в банк



согласен, клинической проблемы нет, зачем тестировать?

это актуально только для культуры клеток



[quote]что касается -мыться и ф топку - зачем постить проблемы. для которых у вас уже есть простые ответы ? [/quote]



постилось в основном для обмена опытом по диагностике - что важно и актуально, а по поводу эрадикации - общемировая позиция большинства культуральщиков - выкинуть заражённую культуру и помыть лабу

можно конечно играться с антимикоплазменными антибиотиками или коммерческими "химиокиллерами", но я пока не знаю ктобы был счастлив после таких попыток... напротив эффективных средств на 100% нет, а вот вывести антибиотико-резистентного мутанта в лабе, ещё более "злого" - это легко[/quote]

О



Ok! Со всем согласен, но в жизни бывают моменты когда ведешь кл-ки, а они "поехала", и культуральщик должен знать (и уметь), что у него еще есть возможность с ней "поиграться" .

Мало ли -что! А вдруг уже и взять такие клетки неоткуда.

Во-вторых, минимализация профессиональных требований - по типу "обнаружил - выкинул- сжег - помылся", не идет на пользу начинающим и развивающимся.

Польза от этого топика будет если 1-2-3 человека закинут сеть и вытащат поставщиков китов для детекции , безо всякой там ПЦР (особенно рассейской), начнут в микроскоп лучше смотреть и лучше видеть, попробуют антибиотики против этой дряни на ощупь, проведут клетки через мышку....

[quote]Ok! Со всем согласен, но в жизни бывают моменты когда ведешь кл-ки, а они "поехала", и культуральщик должен знать (и уметь), что у него еще есть возможность с ней "поиграться" .

Мало ли -что! А вдруг уже и взять такие клетки неоткуда[/quote]

согласен! бывают такие линии что фиг достанешь, очень жалко! не заказывать же всё время в ATCC, пробуем лечить -

http://molbiol.ru/forums/index.php?showtopic=4077&hl=

[quote]Польза от этого топика будет если 1-2-3 человека закинут сеть и вытащат поставщиков китов для детекции , безо всякой там ПЦР [/quote]

согласен о повороте в сторону лучших китов (лучших имеется в виду и дешёвых в том числе) без ПЦР

только молодёжь тут в основном, поэтому кто поделится опытом?

я за 5 лет культуральной работы не сталкивался, хотя с линиями имею мало дел...

Я думаю одним методом детекции микоплазм нельзя пользоваться только одним методом. ПЦР конечно современно и свежо, но в лабораториях в основном определяют только M.homines, но культуры клеток через сыворотки и ткани большей частью контаминированы микоплазмами животного происхождения. Поэтому я пользуюсь в основном двумя методами - микробиологический и люминесцентный. Они не требуют больших затрат. Первичные и субкультуры при подозрение на микоплазму я выбрасываю в топку и не мучаюсь. Клеточные линии я вынуждена подвергать различным обработкам и создавать банк клеточных линий свободных от микоплазм или содержащих микоплазмы в низких титрах. Самый лучший способ обработки клеточных линий антимикоплазменной гипериммунной сывороткой телят.