Привет всем.
у нас есть конфокальный микроскоп, с камерой.
мы решили по одной из работ в литературе, проверить наши параметры, при помощи флюорисцентных сфер, диаметром 175 нм.
их объём должен быть 0.0028 куб микрон.
после того, как мы сняли идеджи этих частиц, и обработки в Авто Деблюре, у нас никак не получается объём и размеры, получаются гораздо больше.
не подскажете, как получить правильные размеры?
Спасибо.

проверьте настройки сканирования

veechi:

Обьём с помощью таких маленьких частиц?? Конечно, лучше культером, на худой конец то боковому рассеиянию на флуоцитометре (но частички должны быть гораздо крупнее!).

Кроме того, не забывайте - на микроскопе у Вас измерятся или площадь сечения клетки, или её наибольший диаметер, в первом случае надо брать отношение клетка/сфера в степени 2/3, во втором 1/3.

Только в культере обьём линейно (для сферических клеток) прпорционален сигналу, поэтому это самый надёжный метод. Опять же и его оможно прокалибровать теми же частичками, что иу Вас в наличие. Но культеровские (несветящиеся) частички для калибрации 1) намного дешевле; 2) имеют гораздо меньший разброс по обьёму.

РУССОМАХА

П.С. Сканирование по 3-Д даёт ещё более высокю ошибку!

Физический предел разрешения световых микроскопов где-то 200 нм. Поэтому у вас никогда не получится точно определить размеры частицы в 175 нм на обычном конфокале.
Обходные пути предела: деконволюция (нужен специальный софт, особые иммерсионные масла и очень точные микромоторы), 4Pi - микроскопия (прибор стоит охрененных денег), StED - микроскопия (в стадии разработки, в коммерческом варианте будет весьма дорог, полагаю).

В вашем случае следует взять сферы по полмикрона и выше.

ААМ

"В вашем случае следует взять сферы по полмикрона и выше" .. и пропустить всё дело на культере. И дешевле, чем всякие продвинутые микроскопии, и сердитее (я имею в виду, точнее, не говоря уже о скорости и статистике: до 20 тыс. частиц в минуту!).

РУССОМАХА

Зачем культура? Взять микросферы по полмикрона (или даже лучше микрон) и померять их на обычном конфокале. И никаких культур и микроскопических прибамбасов ...

Дорогой ААМ:

Вы про <Coulter Counter> слыхали что-нибудь? Поясняю: это счётчик числа и определитель размеров клеток, изобретённый перцем по фамилии <Coulter>, и никакого отношения к "культуре-мультуре" и микробам он не имеет ;-) В нашем народе его зовут просто "культер". Широко применяется в гематологии, где размер клеток имеет клиническое значение, позволяя разделить субполуляции крови (обычно, в купе с другими електро- и фото-методами, позволяющими увидеть форму, шероховатость поверхности, гранулярность ядра, отношеие обёмов ядро/цитоплазма, и т.п.).

Я применяю его при измерении быстрых осмотический ответов, в криобиологии это имеет очень большее значение, определяются проводимости мебраны к воде и криопротектору, и на основе этого разабатваются оптимальны режими воова и вывода криопротектора, скорости замораживаний и оттавиниям и т.п. Так, вот, со всей ответственностью заявляю, для определения обёма клетки или любой твёрдой частицы точнее и быстрее метода нет! Статистика набиратся за секунды,

Вам же на конфокале мерить придётся часами, что бы набрать хотя бы 1000 частиц. Не забывайте, микросферы тоже не все имеют одинаковый обём, существует разброс (обычно - нормальное лапласовское "колокольное" распределение), поэтому статистика необходима. И вообще все микорофографичекие методы, будь то с софтом ил ибез него, по определению не так точны, как <Coulter Methods>. Единственное преимущество- Вы можете посмотреть всё "своими глазами", но это порой обманчиво..

РУССОМАХА

П.С. очень кратко описание принципа дано здесь, но можете поскрести по сусекам на их сайте:

http://www.beckman-coulter.com/products/ap...inciple_dcr.asp

Дык, любезный, если вы изволите разговаривать на какой-то разновидности научного арго, то из этого абсолютно не следует, что другие могут вас понять сразу. Обычно при популярном изложении жаргонизмов стремятся избегать, насколько мне известно ...



Вы условия задачи читали? Человеку нужно отработать методику на конфокале. У него не стоит задача определения микрочастиц как таковых. Микрочастицы используются как тестовая система.



Отнюдь. Набор картинок займет минут 15-20. Остальное дело софта.



Ну надо же, а мужики-то и не знают



См. условие задачи ...

ААМ:

>В вашем случае следует взять сферы по полмикрона и выше.

Ха-ха, Вашим,же и оружием - См. условие задачи: у "мужика" есть 175 нм.


>Дык, любезный, если вы изволите разговаривать на какой-то разновидности научного арго, то из этого абсолютно не следует, что другие могут вас понять сразу.

Дык, уважаемый, хто ж мог подумать, шо мужик работающий в области методов и клеточных технолгий такого жаргона не знал? Звыняйте, хлопцы..

РУССОМАХА (не мужик, однако - из казаков мы ;-)