Уважаемие коллеги.

Мне нужно покрасить клетки (и посчитать при помоши FACS) по внутреннему маркеру Sox2. Следовательно, клетки нужно фиксировать и пермиабилизовать. Вопрос чем и как пермиабилизовать?
Рекомендуют использовать 0,05% TWEEN20 in PBS, 2 min RT. Но в статьях я видел TRITON 0.1% 5 min RT. Эти методы дают различние результаты. Какой из них лучше? Может нужно использовать другой метод?

Спасибо.

Мы обычно пользуемся готовым раствором BectonDickinson Permeabilizing Solution Perm2. Правда, время инкубации около 20 минут и при +4С.

Получается все нормально, правда мы используем его для диагностических целей (в основном, для лейкозов), так что сортировать потом уже ничего не надо....

Методы с Твином и Тритоном- ФТОПКУ: морфология клеток рушится и бекграунд большой.
Libra - все правильно говорит: Fix/Perm от BD - это то, что "доктор прописал".
Ну - или аналогичный набор от eBioscience

we use permabilization buffer -

saponin 0.5%
FBS 0.2%
tween-20 0.005%
Na azid 0.01%
in PBS

and everything looks fine

NIH approved solution - собственно, в цитоперме практически то же самое.
Твина- чуть-чуть ( а не 0.05% )

to Cells-nnm:
Спасибо.
Два вопроса:
1) Как применять этот раствор? 20 min, +4°C?
2) Зачем нужен saponin?

1. +4 overnight (по нашему протоколу) т.е. мы разбиваем staining на 2 дня - 1. - стимуляция 5 часов, surface staining, permabilization, day 2 - add cytokines, incub, wash, flow
2. ну он и обусловливает т.н. пермабилизацию (вместе с твином) - делает поры в мембране клетки и по-моему и в ядерной мембране тоже, что обусловливает проникновение Ab внутрь клетки

Леха, ты что-то путаешь.
Ибо это фиксация overnight делается- а пермеабилизация- как раз 20-30 минут, +4.