У меня проблема в подборе нужной фиксации клеток.
1. Надо учесть трансфекцию по экспресии белка с EGFP.
При фиксации Метанолом снижается кол-во таких клеток.
При фиксации PFA кол-во клеток с EGFP сохраняется.
2. Потом нужно покрасить моноклональными антителами(МКА) с помощью пероксидазного метода.
При фиксации Метанолом окраска есть.
При фиксации PFA окраски нет.
Чем лучше зафиксировать, чтобы потом можно было бы и учесть результат трансфекции по интенсивности и локализации белка с EGFP в уф, а затем покрасить МКА.
И если использовать фиксацию PFA,то на какой стадии ставить пермиабилизацию и с чем?
Если кто-то делал нечто подобное пришлите пожалуйста протокол на wolf252006@yandex.ru
За ранее спасибо.
