CFU assay ja provozu tak - schitaju 100 kletok (iz myshej) i wysewaju ih w 10 cm plate. I ne wazno na kakom passaze ja beru eti kletki, i ne wazno skolko wremeni ja zdu - a zdu ja do 3 nedel, ni razu u mienia ne wyroslo ni odnoj colonii. S drugoj storony, kletki differencirujutsia w adipo, osteo i chondro, to jest hot nemnogo msc no wse taki byt dolzno. Podskazite, kak wy prowodite eto assay?

sajaite v 96- well plate- proshe nabludat

iz rascheta 0,5 kletki na well

spasibo

https://stemcell.com/technical/28374_mesencult%20M.pdf

вот все делаю как положено а не растут. да и растут ли они вообще хоть у кого нибудь?

а клетки вобще прикреплялись? видно на фазовом контрасте что-нибудь?

могу предположить что клетки есть, но вяглядят как дифференцированные, старые и морщинистые. )))

Колонии получали и из крыс и из человека. Начиная с 0.5 кл/см. И в 96 луночных и в 6 луночных и даже на 175 сантиметровых. Растут. С ранних пассажей лучше.
Часто ошибаются в первоначальном подсчете. Как считаете? Как разводите или просто берете микролитры и сеете?
Насчет 96 велл - не советую. CFU все таки расчитана для того чтобы подсчитать процент колоний на число клеток, если будете сажать в 96 луночную то такого числа у вас не получиться из-за увеличения ошибки при посадке (в каких то лунках клетки будут, в каких то нет - конечная цифра неизвестна).

nichego u mienia ne prikreplialos, ni na rannih, ni na boleje pozdnih passagah. prosto beru mikrolitry i seju nu hot by shto wyroslo, hot by straoje i morshchinistoje (a takoje kstati paru raz bylo, ne bolshe).

а оно у Вас вообще живое, то что сеете? предположение конечно из разряда крайностей, но если уж совсем не прикрепляется...

ziwoje. jesli seju ne dlia cfuassay to wsio ziwoje rastiot i razmnozajetsia i differencirujetsia

Попробуйте сделать серийные разведения в среде (вроде того - 1 к 10 затем 1 к 100) чтобы в конце забрать не менее 70 мкл с сотней клеток.
Второе предложение - попробуйте посеять в различных плотностях (у вас сейчас примерно 2 кл на см) - 10, 8, 6 ,4 и т.д.
И последнее. Мышиные МСК вещь очень капризная. Требуют очистки в процессе культивирования. Если средства позволяют - попробуйте какие нибудь коммерческие мск для контроля методики.

Спасибо. хорошо что вы напомнили про очистку. вот я их очистила. пропустила через колонну для иммуноселекции (убрала CD11b) и посеяла. росли хорошо и дифференцировались тоже. Но по правилам же надо пропускать через колонну для иммунодеплеции. купила я эти колонны, уже пару раз пропустила мои клетки через них- мало того, что очищается культура настолько хорошо, что ничего не остается, а то, что все таки остается - не растет. и выглядит, как здесь писали старым и морщинистым. Кто нибудь очищал так свои культуры?
А вообще, есть здесь кто-нибудь кто занимается именно мышиными клетками?