КУЧА вопросов :-(
Ну вот хотя бы такой: как реализовать перенос образца из низкой концентрации ацетона в более высокие. На воздух же наверняка выносить нельзя? И в чем раствор лучше - водный или в буфере???
откликнитесь плиз, если кто специалист!
:-(


[Текст переведён с транслита]

Всё немного не так. Если речь идет о заключении образцов в эпон, Вам после проводки по спиртам (возрастающие концентрации 30-50-80-96 нужно перенести образец в ацетон (чистый), а затем в смеси ацетон:эпон 3:1, ацетон:эпон 1:1, ацетон:эпон 1:3, потом чистый эпон пропитка и потом заключение. Или речь о ловикриле? Или ещё о чем? В любом случае ацетон нужен, чтобы обезводить препарат и его ничем растворять не надо.

Ага, спасибо!
Дело вот в чем - мне нужно поставить методику - клетки на поверхности фотографировать-, причем не только я, но и никто в нашем институте пржде електронные фотографии не делал. Все сведения только из источника "одна бабушка сказала".
Я нашла в интернеtе вот этот сайт:
http://lab.wolf.ru/Test/TEM_SEM.htm
И вопрос такой (прошу пристить, но...) что такое эпон (пардон, я не химик :-()? и ловокрил?
Мне кажется смысл в том, что надо сnачала зафиксировать (в глютардегiде и потом в осмиумтетроксиде) образец и обезводить (в ацетоне) и потом напылить золото (уголь) - и дальше отдаться в честные руки лаборанта.
Я не права?

[Текст переведён с транслита]

fixation with 2.5-3%GA, than OsO4.
Degydratation(ona zhe provodka)EtOH 50-70-80-90-100 i Aceton.
Embeding(zalivka): vse tak zhe, kak skazal microskopist.

Epon(epoksidnaia smola, esli ne vru) nuzhen dlia zalivki obrazca. Bez nee Vy ne smozhete prodolzhat' svoiu rabotu na puti k polucheniu pics.
A potom napyliaite skol'ko Vam budet ugodno.

хорошо объяснили , мы все поняли

To Veronikaa: Ne ponial. Kaki problemy doc? Chego ne poniatno?! Vy skazhite. epon 812(most popular) ne edinstvennoe sredstvo for embedding.

То Вадим:
"Degydratation(ona zhe provodka)EtOH 50-70-80-90-100 i Aceton."
Скажите, а этанол в чем - в воде? (или это смесь должна быть этанол:aцетон???) И тогда вопрос самый первый в силе - как реализовать смену растворов? можно ли просто перекидывать образец в разные сосуды? (он же при этом на воздух попадает). И можно ли из спирта в ацетон - тоже просто в другой сосуд перекинуть?

Про епоксиднаую смолу - я не уверена, что она мне нужна, потому что я НЕ СРЕЗЫ буду делать. Мне нужно сделать типа 3-х мерную фотку - как мои клетки крепяться к подложке. Вроде как мне нужнo просто напылить тяж. металл в раствор (или в вынутый из ацетона образец, - к сожалению я пока не змаю) (для напыления меня командируют к специалистам)

[Текст переведён с транслита]

[Текст переведён с транслита]

[Текст переведён с транслита]

Т.е. я сразу призналась тут, что ничего в этом пока еше не понимаю :-). Но надо понять.

[Текст переведён с транслита]

Pro 3d ia Vam skazat' tochno ne smogu, ne stalkivalsia s takoi zadachei, hot'a sam fixiroval kletki dlia EM.
Iz spirta v aceton mozhno.Tol'ko zachem meniat' sosudy. Vse delaite v odnom. Slili EtOh-zalili Aceton.

No perekidyvat' is Acetona ia Vam ne sovetui. Isportite obrazec. Ia odin raz tak sdelal sluchaino. Chto nuzhno sdelat', esli Vy vse taki budete zalivat'. Vylivat' chast' acetona i zalivat' epon 3:1, vylivaete chast' i liete epon do 1:1 i tak do 3:1. Potom perenosite obrazec v "tabletku" i zalivaete pure epon. That's it.

Владим а каком епоне может идти речь если дамочке нужна поверхность т.е. сканирующая електронка...
там совсем другие прибамбасы тем более в ссылке которую она сама представила все доходчиво написано.....


[Текст переведён с транслита]

Mlia, srazu nado bylo v poste napisat' dlia osobo stupid russians like me, chto speech about scan EM, a ne prosto EM. Tem bolee v ssylke 2 punkta. Ia kak raz smotrel 1-i.
Nu ne nuzhen vam epon, nu i het s nim!

:-) ОК. с епаном разбралась.
Теперь вотрос про спирт. Водные растворы спирта нужны или с ацетоном? И нужен ли спирт вообше? (в ссылке нету его).

[Текст переведён с транслита]

Еше вопрос знатокам.
Где-то мелькало, что вроде полиетиленовые поктытия можно смотреть на ЕМ? Или какие-то другие? (А то полистирол - того, скапутится весь)

[Текст переведён с транслита]

[Текст переведён с транслита]

Я ожидала, что вы нам обясните про эпон посолиднее как-нибудь. Хотя тут пошла такая пьянка, что начинать надо с азов.

спирт - с водой (30, 50, 70, 96, 100%), ацетон.

Похоже, что все-таки не скан, в ТЕМ напыления тоже используют без ультрарезки

Для скана алгоритм таков:
дегидрирование- довести до ацетона,
сушка- либо обхода крит.точки СО2, либо замораживанием-высушиванием. В любом случае нужны спец.приборы, которые должны быть в том месте,
где уже потом вы собираетесь напылять образец.
В общем, это весьма отдельная кухня и то, что вам нужно перед тем поиметь,-это образцы в спирту 70-96 по вкусу.

Скан, Скан, извинете, что сразу не сказала.
Вот это очень похоже на то, что мне предстоит:
"Для скана алгоритм таков:
дегидрирование- довести до ацетона,
сушка- либо обхода крит.точки СО2, либо замораживанием-высушиванием. В любом случае нужны спец.приборы, которые должны быть в том месте, где уже потом вы собираетесь напылять образец.
В общем, это весьма отдельная кухня и то, что вам нужно перед тем поиметь,-это образцы в спирту 70-96 по вкусу."

ВОПРОС: Все-таки в спирту? ...совсем не понимаю, зачем и спирт, и ацетон, или что-то одно, но тогда что именно????

[Текст переведён с транслита]

Ацетон летит быстрее.
До времени хранить лучше в спирту (70-96), потом спирт абс, потом ацетон- 2 смены непосредственно перед сушкой, если обходом СО2. Если сущить замораживанием- высушиванием (сублимация, так сказать), то можно заморозить в спирте, переохлажденном в жидком N2, это по идее должно сказаться благотворно и на подложке.

To novoselv:
Спасибо! Вот теперь понятно!
Высушивать я буду именно в CО2. Вопрос! Если спирт не использовать, то надо вошодяшие концентрации ацетона брать? (20%, 40%...)
Еше вопрос: Как переносить из спирта в ацетон? Ведь ацетон должен быть 100%м... Но если я буду удалять спирт, не оголяя образец, и заливать его ацетоном, то что там останется от этой 100%-сти...
И еше вопрос! Мне сказали, что после высушивания в CО2 я смогу образец безболезненно на боздухе держать, так ли это?

Так, всегда пожалуйста!
1. По моему опыту, все системы проводки- обезвожывания включают ЕтОН. Быть может это дань традиции, но я иначе не пробовал, Так что 70-96-2х100-2хАцетон.
2. По 2 смены 100 ЕтОН и Ацетона должны избавить от лишней воды и спирта. Обычно "оголять" образец можно, но не на долго: слили ЕтОН- залили ацетон.
3. После высушивания образец можно держать на воздухе, но не во влажности. Если нужно хранить несколько дней- неделю, то положить в притертый бюкс или хотя бы чашку Петри что-либо убирающее Н2О, просушенный силикагель к примеру.

To novoselv:
Большое спасибо!

[Текст переведён с транслита]

Еше вопросы:
2.5-3% глютальдегид - в буфере? Мне советовали вроде среду клеточную (но без сыворотки) пойдет ли такое?

Осмиум в буфере? Или в воде?

[Текст переведён с транслита]

Ну-у, знал бы прикуп, жил бы в Сочи .
Тут я уже теряюсь. Я всегда (хотя давно) делал на буфере какодилатном ( глютар- рН-7.5, ОсО4- 6.0).

а кто такой какодилат? (какодол?) :-)
...мне тут сказали что или фосфатный буфер (PBS) или вот среду можно...
а pH так понижаюшийся - важно? - Опыт? Традиции? :-)

[Текст переведён с транслита]

Милочка почитали бы вначале книжку....
а то дяденька дайте воду напиться, а то есть хочется и ночевать негде.....

[Текст переведён с транслита]

Извините, если бы у меня была книжка, я бы наверное не задавала вопросов, верно?
Кроме того меня не теория интересует, а нормальные практические советы тех людей, кто это уже делал. А не профессоров, которые уже 25 лет как пробирки в руках не держали. Ато понаписывают...про енергию електрона. Нафиг мне это надо? Мне сделать надо, а не для диссера.
Кстати, если вы можеле хорошую книжку посоветовать - не откажусь. :-)

[Текст переведён с транслита]

Милочка Вы же сами дали хорошую веб ссылку там если почитать внимательно ВСЕ написано... и для монослойной и для суспензионной културы...
И еще есть пубмед если конечно не лень.....
"Фиксация в теплом 2% растворе глютаральдегида, приготовленном на 0, 15 М натрий-какодилатном буфере или на 0, 1 М натрий-какодилатном буфере с добавлением сахарозы (до конечной концентрации 0, 1 М). Длительность фиксации 2—3 ч при комнатной температуре; при необходимости фиксация продолжается в течение суток и более в холодильнике (5—6°С).
Отмывание культуры от глютаральдегидного фиксатора в растворе Хенкса (растворе Эрла или в среде 199) в течение 2—3 мин.
Постфиксация в 1% растворе четырехокиси осмия, приготовленном на том же буфере, что и глютаральдегидный фиксатор. Длительность фиксации 30 мин — 1 ч при комнатной температуре."
И этого мало???????

[Текст переведён с транслита]

:-) Не возмите за труд, прочитайте еше раз все мои вопросы, и вы, наверное, поймете, почему мне этого было мало.
... и будьте так добры, не надо называть меня "дамочкой", "милочкой" и т.д. Иначе я просто буду пропускать ваши посты. :-)

[Текст переведён с транслита]