Полная версия страницы  English  

Методы

Pages: 1, 2, 3, 4, 5, 6
guest: ммм , 23.04.2007 12:59
-методику обработки РНК ДНКазой!
пример протокола. спасибо.

Вы ишдиваетесь?!

10-20 единиц Кунитца ДНКазы на мг ДНК и Магний 1-2мМ, 2ч на комнате. Все.
Секрет в том, что ДНКаза долджна быть RNAse free, а такую выпускает только Рош, остальные, по их лицензии.
Гость, 25.04.2007 10:32
Глубокоуважаемые коллеги!
Планируем определять содержание внеклеточной ДНК (в тесте с DAPI) в плазме крови грызунов, испытывающих различные воздействия. Подскажите, пожалуйста, каким флуориметром будет удобнее пользоваться (чтобы было дешево и сердито). Пока у нас нет никакого, но есть возможность приобрести. Или стоит приобрести только лампу и фильтры и при необходимости переставлять их на "соседский" прибор?
Гость, 27.04.2007 14:14
уважаемые коллеги и др. кто занимется выделением тотального растительного белка (суммарного,вобщем разных и т.д.)помогите с методикой, последняя надежда на вас люди добрые.....
Гость, 17.05.2007 12:43
Подскажите пожалуйста метод выделения Рнк из растений (для ПЦР)
Гость, 21.05.2007 15:40
подскажите методику выделения суммарного белка из пшеницы (проростков) заранее спасибо
Гость, 03.06.2007 12:36
Народ,не будет ли кто так сказочно любезен подсказать методику выделения мтДНК из дрозофилы.
Заранее many thanks!
ада, 27.06.2007 03:21
привет.
никто не подсукажет как выделять днк из фитофторы?
Гость, 03.07.2007 12:33
Здравствуйте! Не подскажите методы выделения и определения дендритных клеток?
Vilvarin, 04.07.2007 01:17
Здравствуйте уважаемые коллеги! Помогите студентке, то есть мне! Занимаюсь ислледованием клеток крови больных СКВ(системной красной волчанкой) и очень нужна методика выделения гранулярных клеток крови, а именно - нейтрофилов и эозинофилов(авторы не помешают)! Буду весьма признательна!
guest: Гость , 11.07.2007 10:53
Уважаеммые коллеги! Может ли кто-то подсказать методику исследования апоптоза с использованием бромэтидия. Причём разгонка делается не на агарозе! На чём-то жутко дешёвом ( чего нельзя сказать об агарозе!) Слух принёс человек, который абсолютно не шарит в молекулярке. Я же теряюсь в догадках - сама больше по белкам. Если не жалко, можете писать на мыло fyodorova2000@mail.ru. confused.gif
Гость, 18.07.2007 10:35
Уважаемые коллеги!!! Начимающий биолог, провожу работу в области электрофоретических свойств токсинов, белков, на основе капиллярного электрофореза системы Adgilent 3D CE. Пожалуйста поделитесь информацией. Буду очень признателен и благодарен.
P.S. - Если кто откликнется пожалуйста сообщите адрес куда обратиться. Еще раз спасибо за внимание!
Гость, 27.07.2007 17:33
4 M guanidine thiocyanate, 0.2 M sodium acetate pH 5.0, 25 mM EDTA, 2.5% (w/v) PVP-40 1 М potassium acetate помогите приготовить лизирующий буфер при экстракции РНК загвоздка с ацетатом Na
Гость, 12.08.2007 09:01
Здравствуйте! Я студентка, занимаюсь иммунитетом растений, а конкретнее действием на него дельтаэндотоксина Bacillus thuringiensis. Нужно провести анализ плодов огурца на наличие нитратов. Помогите, пожалуйста, с методикой.
e-mail: aleksa-simonova@mail.ru
Гость, 03.09.2007 10:07
Подскажите пожалуйста! Мне нужно порезать ДНК, как ее можно озвучить, сколько по времени, при каких условиях?
Guest, 03.09.2007 10:42
Если Вам важно "не угробить" белки, то можно озвучить ДНК импульсами по 10-15 сек. на ледяной бане, с перерывами на охлаждение. А какой объем вам нужно "озвучить"? Если это эппендорфф, то суммарное время 60-70 сек. озвучки дадут фрагментацию ДНК около 500-700 пар. Но это очень примерно, т.к. длина фрагментов зависит от конкретных условий (объем раствора, мощность озвучки, концентрация ДНК, форма электрода и даже форма сосуда, в котором "озвучиваете").
Гость, 03.09.2007 16:22
Спасибо,мне именно это и нужно!
Гость, 07.09.2007 08:57
Здравствуйте уважаемые коллеги! Посоветуйте что делать если линейные мыши не дают толком асцит (1-2 мл от силы), да к тому же энтерит страшный. Может пристан токсичный?
Ilina Nadezhda, 17.09.2007 09:44
Уважаемые коллеги! Может у кого-нибудь есть условия проведения FISH в суспензии клеток, чтобы при этом не разрушалась их оболочка.
guest: ммм , 17.09.2007 12:06
Это как? Условия денатурации двухцепопочной ДНК не располагают к сохранению клеточной оболочки.
Ilina Nadezhda, 18.09.2007 10:53
Есть статьи, где умельцы проводят амплификацию ДНК в клетках, потом проводят гибридизацию in situ. Но протоколов нет! Может быть кто-то делал подобное у нас?
guest: ммм , 18.09.2007 11:58
Ну есть, но это не я. В Петергофе у Гагинской почти на поток поставлено. Только оболочки все равно ек.
LLEC, 19.09.2007 13:17
Помогите найти протоколы как красить культуру клеток при помощи пероксидазы и фосфотазы?
SDmitriyV, 19.09.2007 16:12
Всем доброго время суток!
Коллеги, поделитесь плиз методикой по выделению цитоплазматической и митохондриальной фракций белковых лизатов из культуры клеток (состав лиз-х буферов и т.д.) для Western Blot анализа.
Конкретноая задача: Посмотреть в динамике выход цитохрома С из митохондрий в цитоплазму.

Заранее благодарю!
Гость, 23.09.2007 19:35
Люди!!!!!!Спасите!!!!я студентка ММА им Сеченова...нам кое как объяснили титрирование.....в четверг уже контрольный модуль.....у мня есть все эти 13 вариантов....но решается у всей моей группы....тока по 2-3 задания(((((я уже не знаю куда обращаться(((
LLEC, 15.10.2007 13:07
кто нибудь что нибудь о миграции клеток,использование 6ти канальных часберов,хемотаксис
Гость, 17.10.2007 00:42
Коллеги! Поделитесь,пожалуйста, методами экстракции митохондриальных белков из клеток и тканей для Western Blot анализа. Заранее благодарна. e-mail: alina_1000@mail.ru
Гость, 23.10.2007 13:53
Коллеги поделитесь знаниями? или скиньте ссылку!Генотипирование лошадей и КРС???
zorya_85@mail.ru Заранее спасибо!
bioandy, 02.11.2007 14:18
Уважаемые коллеги! Если есть возможность поделитесь пожалуйста методическими публикациями или скиньте ссылку:
Методы трансформации у растений микробомбардированием частицами золота с иммобилизированой ДНК. achaplya@yahoo.com
Зарание благодарен!
Gulmira, 15.11.2007 18:56
Уважаемые коллеги! Подскажите почему у меня ДНК получается короткой, нужна длинная. Буду благодарна.
guest: ммм , 15.11.2007 20:09
-Уважаемые коллеги! Подскажите почему у меня ДНК получается короткой,

потому что вы ее ломаете.
-- нужна длинная. Буду благодарна.
Больше нескольких сотен килобаз получить трудно обычными методами.
Gulmira, 22.11.2007 16:49
Уважаемые коллеги! Поделитесь методикой получения длинной геномной ДНК бактерий. Заранее благодарю.
Гость, 22.11.2007 19:06
Привет всем! У меня тут по работе задача, посмотреть является ли STAT3 транскрипционным фактором нашего гена. Вопрос, существует ли клонированный STAT3 в активированной форме (как это есть для NFkB)? Заранее спасибо
guest: ммм , 22.11.2007 19:43
-- меня тут по работе задача, посмотреть является ли STAT3 транскрипционным фактором нашего гена.

А промотор то от гена у вас есть, попробуйте сделать гипершифт с антителами на STAT3 на последоватьельности вашего промотора. Только антитела должны быть такими чтоб не мешали ДНК связыванию фактора.
Гость, 23.11.2007 11:22
Не, в том то и дело, что промотора мы толком и не знаем. Я посмотрела, вроде как промоторная зона, с которой может связываться STAT3, располагается очень далеко от нашего гена (порядка 40килобаз) и возможно контролирует не только наш ген, но и весь кластер (в нем еще 5 генов). Мне для того-то чистый STAT3 и нужен, чтобы понять, кто от него активируется и где промотор искать
Act, 23.11.2007 13:05
ya student 4 kursa i tema diplomki: poluchenie kratkofragmentnix DNK phosphoamidnim sintezom nukleinovix kislot. podskajite kuda bol`she vsego obrachat` vnimanie, tak kak ya zanimayus sintezom tol`ko 3 nedeli i mne bi xotelos` ne teryat` vremya po prostu. kstati ya ximik.
Гость, 23.11.2007 13:40
ответ ммм: я еще раз посмотрела литературу и посчитала. Вы привы, гипершифт нам подходит( я правда его никогда не делала). Реально ли сделать гипершифт на 12000бп? Потому как я нашла метод на очень короткие участки (100-500бп). Мой план отписиарить весь большой кусок, затем порезать его (например NOT1)и только потом дать транскр.фактор и антитела.
guest: ммм , 26.11.2007 21:25
--Реально ли сделать гипершифт на 12000бп?

Нет конечно, да и бессмысленно. Это же чуть ли не в 100 раз длиннее чем промоторные области.

---Потому как я нашла метод на очень короткие участки (100-500бп). Мой план отписиарить весь большой кусок, затем порезать его (например NOT1)и только потом дать транскр.фактор и антитела.

А вы будете писить 12kb?

В вашем случае возможно имеет смысл использовать хроматин имунопреципитацию.
http://molbiol.ru/protocol/17_19.html

Вот только как проанализировать результат. Если у вас есть сиквенс этих 12kb, то можно просто с шагом 1000 или 2000b подобрать праймеры вдоль всего фрагмента и попробовать с каждым из отрезков. А вот если сиквенса нет то придется подбирать какие-то вырожденные праймеры под промоторные области. Ну и возможны контаминации при использовании вырожденных праймеров.
guest: ммм , 26.11.2007 21:29
ну и в принципе ChIP ПЦР фрагменте.
Гость, 06.12.2007 07:35
протокол ИФА требуется,плз. если есть можете на этот е-mail: dnar@ngs.ru скинуть
guest: ммм , 06.12.2007 10:54
-протокол ИФА требуется,плз. если есть можете на этот е-mail: dnar@ngs.ru скинуть
какого ИФА сколько антигенов стоолько и протоколов не говоря уже о вариациях в разных фирмах производителях. В разних ферментных метках и тд и тп.
lagumok, 09.01.2008 09:38
Привет всем! не подскажете особенности приготовления поликриламидного геля. какой буфер использовать. просто всегда работала с агорозным. Заранее спасибо
guest: ммм , 09.01.2008 15:44
--Привет всем! не подскажете особенности приготовления поликриламидного геля. какой буфер использовать. просто всегда работала с агорозным. Заранее спасибо.

Какого геля! Для укладки волос? Для разделения ДНК? Для разделения РНК? Для разделения белков?

Вы сайт читать умеете?:
http://molbiol.ru/protocol/11_04.html#s3
http://molbiol.ru/protocol/13_02.html
http://molbiol.ru/protocol/17_01.html
http://molbiol.ru/protocol/17_10.html
Kryshen Kirill, 11.01.2008 13:23
Уважаемые коллеги! Кто-нибудь оценивал фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов. Поделитесь опытом пожалуйста.
Гость, 13.02.2008 15:32
Дорогие коллеги!
Регистрирую генноинженерную субстанцию. Требуют в "определении содержания примесей ДНК штамма-продуцента" расписать методику молекулярной гибридизации подробнейшим образом. Подскажите методику получения денатурированной ДНК из спермы лосося и кстати какой она фирмы. Может есть где-то стандартные протоколы?
Леонова Наталья
Гость, 15.02.2008 11:21
Здравствуйте, коллеги!
Подскажите, пожалуйста, при какой найменьшей концентрации спирта этилового начинается денатурация белка или где эту информацию можно найти. Заранее благодарю
guest: ммм , 15.02.2008 16:57
---Подскажите методику получения денатурированной ДНК из спермы лосося и кстати какой она фирмы. Может есть где-то стандартные протоколы.

--Подскажите методику получения денатурированной ДНК из спермы лосося

Водный раствор(или в ТЕ-буфере) ДНК держать на кипящей водяной бане 5-10'.

--кстати какой она фирмы.

Любой!

--Может есть где-то стандартные протоколы.
В смысле фарм статьи. Тогда ищите в международной фармации.

Если просто методику, то в Маниатисе

http://molbiol.ru/forums/index.php?showtopic=97211
guest: ммм , 15.02.2008 17:01
--Здравствуйте, коллеги!
Подскажите, пожалуйста, при какой найменьшей концентрации спирта этилового начинается денатурация белка или где эту информацию можно найти. Заранее благодарю

Все зависит от того что это за белок один он, или в компании других и от температуры раствора.

--или где эту информацию можно найти.

В оригинальных статьях.(База PubMed) По биофизике денатурации или в старых биохимических статьях. По идее с такой информацией должно быть не густо. Но что-то обязательно найдеся.
Тфтьяна, 17.02.2008 18:56
Подскажите пожалуйста методику окраски эндокринных клеток по Гримелиусу и Массона-Гамперга
Гость, 19.02.2008 14:27
--Здравствуйте, коллеги!
Подскажите, пожалуйста, при какой найменьшей концентрации спирта этилового начинается денатурация белка или где эту информацию можно найти. Заранее благодарю

Все зависит от того что это за белок один он, или в компании других и от температуры раствора.

--или где эту информацию можно найти.

В оригинальных статьях.(База PubMed) По биофизике денатурации или в старых биохимических статьях. По идее с такой информацией должно быть не густо. Но что-то обязательно найдеся.
Спасибо, еще раз
guest: Гость , 22.02.2008 19:36
ПОМОГИТЕ!!! PLEASEЕЕЕ!!!! Какой комплекс образует додецилсульфат натрия с белком при электрофорезе???
Это — лёгкая версия форума. Чтобы попасть на полную, щелкните здесь.
Invision Power Board © 2001-2024 Invision Power Services, Inc.