Здравствуйте, уважаемые коллеги!
В лаборатории занимаемся тем что пытаемся культивировать клетки на различных 3D субстратах, в том числе на коллагеновых гелях, но покупать последнии пока не представляется возможным, поэтому используем подручный материал. так для производства колаагена I - крысиные хвосты, сухожилия которых растворяем в 0.1% уксусной к-те. Вот только потом после нейтрализации к-ты гель у нас полимеризоваться совсем не хочет! Может быть кто подскажет ссылочки на корректные протоколы производства коллагеновых гелей? Еще было бы интересно где можно было бы достать коллаген IV и как из него сделать гель.
Надеюсь на Ваше внимание и помощь! Заранее огромное спасибо!

А вы кто и откуда? По поводу коллагеновых гелей - коллаген I получается их крысиного хвоста достаточно просто, полимеризоваться должен, если хорошо нейтрализуете. А при какой температуре вы это делаете? Он хорошо полимеризуется при +37, при охлаждении может опять превращаться в жидкость.
Коллаген IV получают из EHS-саркомы (мыши) или плаценты человека, но тут достаточно сложный процесс. Сделать из него гель - достаточно дорогое удовольствие, нужны большие количества. Подумайте, так ли вам это надо?

Это я была раньше. Вдогонку предыдущему сообщению - а концентрация коллагена какая, может, он при такой и вообще не полимеризуется?
Протоколов в сети куча, ищите конкретно к вашему случаю.

Коллаген I растворять в 0,1% уксусной кислоты(фильтрованной через 0,22мкм) при +4 в течении нескольких дней (а то и месяца) - перемешивать как можно чаще.
Критично то что нити сухожилий надо щепить как можно мельче (вплоть до еле различимых нитей), иначе в растворе будут плавать настоящие куски.
Концентрацию считать сложно - легче делать перенасыщенный раствор (в котором перестают расходится крупные куски), например такой можно получить, если полностью собрать материал с 3 хвостов взрослых крыс и растворить в 100-150мл.
Потом раствор нужно ЦФ при +4 в течении 1-2 часов при 3krpm. ( если крупные куски и муть не упала на дно, центрифужить еще)
Раствор должен получится вязким, но достаточно прозрачным
Хранить при +4

Раствор можно нейтрализовать NaOH.
Гель полимеризуется при +37, практически сразу.
Лучше сразу добавлять 10%, 10кратной среды, например среды 199, а также Hepes, чтобы клетки чувствовали себя лучше.

Сам из МГУ, каф. эмбриологии.
Как из крысиного хвоста получается - давно знаем, пробовали, что-то получается, Делали все при +37. Теперь вот хотели с IV попробовать, наверное надо, именно к этому моменту протоколов не находим, друзья предлагали пуповину брать... как думаете соглашаться и сколько надо тогда материала?

Угу, спасибо, есть мнение, что лучше после центрифугирования, перед тем как в гель все заполимеризовать лиофилизировать - заодно мол и плотность узнаю и потом все должно получиться лучше... на днях собираюсь попробовать, может чего получится...