много разрозненнои информации на форуме по организации работе с клеточными линиями. потому возникла идея создать новую тему, в которои можно обсудить как организацию работы в культуральнои так и нюансы работы с отдельными еукариотическими линиями

Задаваите вопросы, постараюсь в полнои мере на них ответить

дык форум отдельный же есть.

не видел такого форума, где собраны бы были советы не только начинаюшим но и уже работаюшим по оборудованию, конкретным случаям использования. примером является тема "ламинар и горелка", человек создавал ее сам, а можно бы было эту дискуссию провести здесь, а не создавать массу специализированных тем.

не морочьте голову. Форум тут : http://molbiol.ru/forums/index.php?act=SF&s=&f=66

Попробуйте оживить форум ферментер.ру
Может там появятся желающие поговорить о крупно маштабном культивировании?
У меня правда ничего не получилось ...

о. а может здесь поговорим о крупномасштабном культивировании??

такой чайницкий вопрос - есть термостат, внутри роллер. есть стеклянная бутыль.
клетки обычные постнатальные фибробласты кожи - растут на обычной DMEM 10%FBS. в матрасике в инкубаторе растут.
наливаю в роллерную бутыль, добавляю HEPES, бутыль по площади как 8 75см2 матраса. 100мл среды, 5млн клеток. запускаю крутиться - 1RPM

через неделю снимаю клетки с бутыли - количество не увеличилось, клетки стали курпнее в размерах, вакулизировались, после того как посадил обратно в инкубатор, очухались через 3 дня и пошли опять делиться.

вобщем садяться на стекло но не растут.
как вы думаете - в чем проблема? HEPES давал 25mM - может мало(много)?
может быстро крутится?

Роллер пластиковый или стекло. Была такая же проблема с пластиковыми, заставил лаборантов древнее стекло отмыть (сам сначала с хромпиком), потом водой с мылом. потом бидистиллятом и все стало нормально. но у меня была перевиваемая культура

Уважаемый Alexmac!
Воспользуюсь новым форумом, чтобы задать вопрос, неприлично простой даже для начинающей (этот же вопрос задан как отдельная тема "лимфоциты периферической крови", но вряд ли кто обатит внимание):
Как подобрать концентрацию фитогемаагглютинина для ЛПК джунгарского хомячка?
Работа поводится по упрощенной методике Графодатского и Раджабли:
"Кровь забирается в побику с р-м гепарина (гепарин разводится культуральной средой в 4 раза; 0,25 мл гепарина на 5 мл крови).
Плазму и лейкоцитарный слой собрать в побирку и разбавить культуральной средой (Игла или 199) в 4-5 раз. Добавить ФГА или другой митоген - 20 % от общего объема". При этом не указано, какова концентрация р-ра ФГА.
Дополнительная проблема: у хомячка можно собрать не более 0,2 мл крови (объем суспензии в культуральной среде - всего около 1 мл). Может быть, стоит развести суспензию культуральной средой до большего объема?
Буду очень признательна, если откликнитесь!

Совет по фибробластам: добавьте 1/4 кондиционированной среды (то есть старой) при пересеве.
Кстати, почему роллер - 3шт 225 см2 флакона и всё.

кстати, спасибо за внимание и советы - отвечаю на свои вопросы

проблема была в HEPES (действительно может помочь кондиционированная среда) -в конце концов клетки росли без него, и в высокой скорости - надо запускать при посадке клеток на пластик 0,3-0,4rpm, а при культивировании - 0,1-0,2 rpm

а роллер нужен был для отработки методов.

уважаемые знатоки у меня вот такой вопрос назрел
девайсы для получения клеточных культур высокой плотности
вроде
cell lift или spin fiter от New Brunswick Scientific
http://www.nbsc.com/bf3000_cc.aspx
применяются в при промышленном культивировании клеток
или все это годится только для лабораторнх ферментеров??

spin fiter = spin filter
лабораторнх= лабораторных
пардоньте

или задам вопрос более глобально
имеем производство вакцины, где репродукции вируса идет в первично - трипсинизированной культуре клеток куриного эмбриона (без особых проблем)
имеет ли смысл горячо убеждать любимое начальство
что лучше бы нам перейти на перевиваемые культуры, биореакторы и микроносители и прочие бессывороточные среды
т.е. стоит ли отказываться от отработанной годами технологии в пользу вышеописанных чудес - потому как производство станет дюже технологичным и высокорентабельным
спасибо
за Ваши авторитетные мнения

а какие клетки планируются в качестве мишеней-продуцента для вируса?

здравствуйте всем. впервые работаю с лимфоцитами периферической крови..
следую протоколу посадила клетки во флакон.... а сегодня ониобразовали конгломераты.
поделитесь опытом, кто нибудь сталкивался с такой бедой?

В чем посадили?
По какому протоколу выделения работали?

Не подскажите, где можно пройти обучение по культуральной работе (нужна информация по организации работы, самой лаборатории, борьба с заростом и т.д.)? Чтобы уровень лаборатории был приличный, в Москве или Европе.

а такие тренинги бывают?

могу посоветовать почитать
http://narod.ru/disk/5568921000/Culture%20...s%20V5.rar.html

Ну, может, есть лаборатории, готовые поделиться опытом, не безвозмездно. За книжку большое спасибо, очень классная, давно ищу.

лабораторий полно, во многих из них могут поделиться опытом, особенно не безвозмездно.
но вам ведь наверное нужен какой-то сертификат, или диплом или что-то такое официальное? чтобы были лекции, семинары и практические тренинги?
а таких мест я лично не знаю.

последний пост мой

ничего официального не нужно, только знания. В книжках можно многое почерпнуть, но хотелось бы посмотреть в реалии, как правильно работать, что делать, чего не делать.

черкните в личку емэйл, вопрос можно обсудить.

Гостю от 10.12.2009 20:01
Официальные курсы есть в Питере у БиолоТа, они там и учат, и сертификат дают. Про то, что там происходит, сказать не могу - пока не была, но запланировала учебу на этот год - посмотреть, как другие работают ))

отучитесь - напишите подробности