Уважаемые!
Недавно столкнулся с такой проблемой: для SDS-фореза брал акриламид Serva, некогда он был хороший, но, видимо, вышел срок. При длительном хранении, говорят и пишут, образуется акриловая кислота. Поэтому хочу перекристаллизовать его. Буду благодарен за советы и рекоммендации бывалых, кто имел дело с подобным..
Cookie

типа так: закипятить хлороформ (~56 градусов вроде), накидать акриламид, дождаться растворения, перенести на лед, фильтровать, ссыпать на поднос на фильтровалку и сушить под тягой. Хлороформ должен быть !очень чистый! (потому советую проверить на малой порции, предварительно). Если после сушки будет выглядеть очень белым и чешуированным () - есть контакт. Помнить, что он канцероген - обязательно! )) - не дышать, не допускать контакта с кожей! Вроде все. Все, что помню. Может еще кто подскажет если я нахомутал где .

Вот-вот, только не забудьте, латексные перчатки в хлороформе растворяются, поэтому для перекристаллизации подыщите что-нибудь железобетонное .
И еще, на льду у вас много акриламида останется раствореннным, так что кристализовать вполне можно и на -20.

Попробуйте просто почистить акриламид ионообменной смолой. Мы пользовали ту, которой набивают колонки для очистки воды, что то типа "Элгалит". Забыл точное название. Делали 40% раствор а-а с нужным процентом бис-а-а, промывали чистой водой смолу, обсушивали ее на фильтровашке и крутили с акриламидом часик-два. Потом фильтровали через стеклянный мелкопористый фильтр и все. Удавалось довести до ума реаналовский а-а десятилетней давности и желтого цвета. Делил белки не хуже сигмавского.

Да и с хлороформом, это чуть-чуть ингаляционное снотворное, а при окислении, особенно в пламени горелки, образуется соединение подобное фосгену. Дышать глубже! Работать только в под ХОРОШЕЙ вытяжкой!!!

Mixed bed resin тоже годится. Сделать сток, и на ночь со смолой на мешалку.

мы его так и храним - готовим сток, туда немного смолы
(вот не помню какой - из баночки ) и на +4

со смолой надо быть осторожным, т.к. некоторые матрицы растворяются
вместо почистить, получается наоборот....

а про перекристаллизовать, помню нарыл я методу из спирта...
а был это год 93.... подумал, подумал... да и махнул на это рукой...

Полностью поддерживаю. Мы пользуемся смолой AG-501-X8 (BioRad) того же года выпуска, что и Реаналовский акриламид Но это для рядовых форезов. Для ценного лучше или перекристализовать или взять свежий. Но и свежему смола не помешает.

акриловая кислота образуется, можно по рН померить (не помню, какой критический, но вполне у Остермана может быть).
но ИМХО(!) лэммлевский форез - штука почти неубиваемая. главное - не забыть глицина в электродный буфер добавить, остальное - плюс/минус км. юзала даже такой древний АА, что его раствор был желтым, а все нормально делилось. так что (опять же имхо) не стоит тратить время (здоровье и денги) на перекристаллизацию (или ионообменники), а плюнуть на него или заказать свежий АА.
вот при IEF - да, пренебрегать этим не стоит.

Cookie, может быть проблемы не в АА? может быть слишком много наносите или белок ваш в буфере с высокой ионной силой?

сорри за флуд, но еще бывает "форезная непруха". мистическая вещь. форезы не получаются - переделываются ВСЕ реактивы - а они (форезы) все равно кривые - проходит некоторое время - все ОК (при этом, если старые реактивы не выбросить, то после окончания "форезной непрухи" их можно использовать)

5 % водный раствор акриламида должен иметь рН не ниже 5, а оптическая плотность 1 % раствора при 290 нм не должна превышать 0,15.
Остерман.

Поскольку у нас долгое время не было чистого акриламида пригодного для заливки геля, то мы в течение двух лет перекристаллизовывали акриламид марки "для синтеза". Мы делали это так: в 1л перегнанного(!) хлороформа (кипит он, кстати, 60-61С) засыпали 200г акриламида. Затем при перемешивании нагревали до кипения (не забудьте поставить на колбу обратный холодильник если не хотите надышаться хлороформом), пока весь акриламид не растворится (есть вероятность, что что-то не растворится, но это "что-то" - не акриламид). Затем ГОРЯЧИЙ раствор надо как можно быстрее отфильтровать. Здесь важно, чтобы и колба, в которую вы фильтруете, и фильтр Шотта были нагреты до ~60С (мы перед фильтрованием кладем все части в сушильный шкаф, а потом резко собираем и фильтруем). Если замешкаетесь и фильтр остынет, то акриламид закристаллизуется прямо в фильтре. Советуем потренироваться на 100 кубиках раствора, а то может быть мучительно больно (как у нас в первый раз). Процедура фильтрации обязательна! Далее отфильтрованный раствор надо охладить сначала при комнатной температуре, а затем в холодильнике (лучше в морозильнике до -20С). После этого фильтруете акриламид, пока холодный, и сушите при комнатной температуре под тягой, поскольку акриламид - нейротоксин. Получаете 180г чистого акриламида.
Из полученного акриламида готовим 40%-ый раствор стока, который перемешиваем ночь с активированным углем и смесью катионо- и анионообменников (BioRad). После этого фильтруем через мембранный фильтр и только после этого получаем акриламидный сток готовый к употреблению.
Вот так вот! Конечно вся эта процедура отнимает время, но зато есть уверенность, что для фореза мы используем чистый гель.

А может его купить? он не так уж и дорого стоит

А можно взять на 100 мл этилацетата 15 г акриламида - до 70 С (под тягой) - отфильтровать горячим, охладить до RT. После кинуть кристаллик чистого АА, либо бис--АА - получите чистейшие кристаллики АА. (Правда выход % 50-60), так что может легче и купить.

Никто не сомневается, что купить легче, только вот форум называется: как перекристаллизовать?

Приветик!
Да, растворчик у меня желтоватый! И новый есть, только его вести надо с биостанции. Вообщем, привезут, да вот время поджимает.
Попробую проверить pH.
СПАСИБКИ
Форез последний получился ровненький, хорошенький. Да вот идет плоховато. С Power Supply тоже вроде впорядке. Растворя для нанесения проб деляю из ацетонового порошка и белки собираю изначально 10мМ PBS, так что высокая ионная сила отпадает.