Люди! Допоможіть! Вперше ставлю імуногістохімію. Нехай простять мене китайські хомячки (СНО) Як краще це робити - в плашці (скільки сіяти і на який день аналізувати) чи приготувати мазки? Як фіксувати?

Так иммуногистохимия (срезы, слайсы, парафин и все такое) или иммунохимический/иммунофлуоресцентный анализ клеток из культуры ("...в плашці (скільки сіяти і на який день аналізувати)..")? Какова задача то?

з культури! треба один білочок знайти.

Дык, а почему тогда "гистохимия", коли культура?
Найти треба секретируемый белок или экспрессируемый на поверхности клетки/внутри ее?
Если первое - то иммуноферментный анализ/бид-эррэй
Если второе - проточка/конфокалка/элиспот

Задача була поставлена саме так, я не шарю
Білок секретується назовні, однак сподіваються, що чутливість метода дозволить виявити його в цитоплазмі в достатній кількості.

Надо шарит, однако... Тупой исполнител- хуже китаиского аспера....

Ню-ню!!! Я тільки вчусь!!
Просвітіть тих, хто в бронєпоїзді чим імуноцитохімія не підходить в даному виипадку?

Определитесь с терминологий сначала, молодой человек.

Білок виявляли колись в середовищі за допомогою ІФА, тепер треба його знайти в самій клітині.
Вище названі методи - не доступні, треба виходити з того, що є.
Є клітини з шуканим білком, є антитіла. Чим не імуноцитохімічний аналіз?

Чому у більшості протоколів - фіксація в орг.розчинниках при мінусовій температурі?

А что доступно?

P.S. Пиши на каком-нибудь из "международных" языков , ибо с украинской внутренней терминологией- увы, не знаком.

P.S. Фиксация клеток обычно при +4 в параформальдегиде, например (для проточки).

в доступных мне протоколах - метанол, ацетон, разные комбинации - несколько минут при -20 С. Зачем так морозить?

Хм, протоколах для чего? Для такневой иммунгистохимии на срезах? так сие- совсем другая история. К клеткам в суспензионной культуре- неприменима.

Напиши подробно, что требуется поймать и где - тогда можно будет подобрать протокол соответствующий.

да нет же! я же не совсем ето... в протоколах для иммуноцитохимического иследования культур клеток. белок АроА1 ищем. думаю, фиксаторы типа спиртов и ацетона будут в сам раз. как на счет формальдегида?...
вся процедура проходит в лунке плашки. фиксировать влажные препараты? иль подсушить - везде по-разному пишут, кому верить?

ты чо русский забыл

Помогите советом, пожалуйста.! Кто красил на гетерохроматин? Никак не могу выявить его. В чем загадка-может подскажите!

Забыла сказать. первичные антитела использовались К16Н4rabbit и К9Н3rabbit

Добрый день. Кто просветит - система детекции и система визуализации в ИГХ это одно и тоже? Какие фирмы продают Первично-меченные антитела (ферментами или флюорохромами)?

Смотря по до что:

http://www.biocompare.com рулит

Кто скажет как использовать криопротекторы при заморозке тканей?

Итак, у вас покраска клеток на монослое.

При фиксации метанолом снимается липидный слой, а белки осаждаются. - 20 нужно, чтобы не было артефактов. Затем красите клетки первыми антителами, потом вторыми.
Но иногда такая фиксация плоха, а некоторые вещи не прокрашиваются (например, актин меченным фаллоидином).
Тогда идет фиксация 4% формальдегидом на PBS, лучше +4. И лучше сразу с 0,1% Тритоном Х100. Чтобы сделать поры в мембране для антител.

ПРИВЕТ!НЕ ПОДСКАЖИТЕ ГДЕ НАЙТИ ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ НАРУШЕНИЯ О.В. ПРОЦЕССОВ В КЛЕТКАХ ПЕЧЕНИ.аТО ВСЕ ОДНИ РЕЗУЛЬТАТЫ ЧЬИХ-ТО ОПЫТОВ ВЫДАЮТСЯ.

Очень нужна информация о новых полимерных системах обнаружения., что там за полимеры, механизм действия их... Ничего не могу найти по этому поводу кроме фирм, которые распространяют эти новые системы и какие это высокочувствительные методы и всё... Мне очень нужно больше информации.

Система детекции и система визуализации - это одно и тоже!
очень хорошие есть у Springbio. Работают и на мышках и на кроликах, очень чувствительная. Мы раньше другой пользовались, было много неспецифики. С этой системой такого нет (у нас безбиотиновая)

механизм там обычный - после инкубации с первичным антителом капается раствор полимера - это здоровая молекула (сахар) коньюгированная с кучей вторичных антител и HRP одновременно. За счет вторичных антител она цепляется к первичным, а потом все это коньюгируют с хромогеном, который выявляет пероксидазу хрена и окрашивает весь этот комплекс.

Я выше говорила про детекцию, которой мы пользуемся- там еще более хитрая технология - там не здоровый сахар,а коротенькие олигомеры с 1й молекулой HRP на конце. Они и в ткань лучше проникают, и сигнал локальней и четче, чем с полимером. Так что нам очень даже нравится.

механизм там обычный - после инкубации с первичным антителом капается раствор полимера - это здоровая молекула (сахар) коньюгированная с кучей вторичных антител и HRP одновременно. За счет вторичных антител она цепляется к первичным, а потом все это коньюгируют с хромогеном, который выявляет пероксидазу хрена и окрашивает весь этот комплекс.

Я выше говорила про детекцию, которой мы пользуемся- там еще более хитрая технология - там не здоровый сахар,а коротенькие олигомеры с 1й молекулой HRP на конце. Они и в ткань лучше проникают, и сигнал локальней и четче, чем с полимером. Так что нам очень даже нравится.

А вот вам более интересный материал (протоколы для иммуногистыи имаджинга):

User_protocol_for_multi_color_immunohistochemistry_staining_in_intact_tissue.pdf размер: 3.86 кол-во скачиваний: 63