Необходимо очистить T. pallidum от клеток кролика. В литературе нашли метод очистки с помощью центрифугирования в градиенте плотности Ficoll. Как оно часто бывает, полностью статью раздобыть не удалось. Но все-таки из других статей удалось составить приблизительный протокол.
1) Центрифугируют трепонем при 20000g - 15мин (осаждают)
2) Ресуспендировать в 40ml PBS (содержащего 0,5% бычьего сывороточного альбумина и 7% Ficoll)
3) Приготовить прерывистый градиент Ficoll-PBS
плотности: 1,045; 1,055; 1,065; 1,075; 1,085.
Суммарный объем = 25ml
4) 10ml суспензии наслоить на 25ml градиента
5) Центрифугировать при 7000g - 15мин
6) Трепонемы должны оказаться в верхних зонах градиента (1,065-1,055; 1,055-1,045)
Ну, как!?
Может кто-нибудь выделял бактерии описанным способом? Поделитесь.
И самый главный вопрос: как найти эти самые зоны, если бактерий у нас немного???