Прошу поделиться опытом.
Работаем с вектором pIRES2-EGFP (Clontech)... ген EGFP находится за IRES-элементом, MCS для вставки целевого гена - перед IRESом.
Конструкций с целевыми генами пока не делали - хотели проверить на клетках пустой вектор. то есть уровень экспрессии EGFP по его свечению... И тут такая неприятность:
К сожалению, при трансфекции "пустым" вектором различных линий клеток, в том числе HEK293 и A549, получаем крайне низкий уровень светимости EGFP по сравнению с вектором pGreen... Есть мысль, что проблема как раз в том, что между промотором и IRESом нет вставки, что обуславливает неэффективную трансляцию EGFP.
Может ли такое быть при использовании IRESа? Случалось ли работать с таким вектором? И вообще - каково Ваше мнение об этом векторе: стоит ли с ним работать, или он часто так шалит?
Заранее благодарю за помощь.
