Может кто знает и посоветует, куда и к кому обратиться, чтобы заказать выполнить качественный анализ растительного сырья для кандидатской. У нас в провинции-в Пятигорской фарм. академии- нет соответствующего оборудования, а время поджимает...
Обращались в некоторые "именитые" Вузы, но в ответ .... тишина.
Будем признательны за помощь.

А что нужно то?

Мы занимаемся исследованием определенных растений для дальнейшего изготовления на их основе лекарств и БАДов. Нам нужно провести качественный анализ растительного сырья на хроматомасс-спектрометре с жидкостным хроматографом.

Тогда Вам сюда! - www.anchem.ru

типа хАчЮ всё знать......

зы масс-спек с жидкостником вам выдаст забор из нескольких тысяч пиков.... и что дальше? Кстати, что вы хотите от жидкостника - я имею в виду детектор, подвижная/неподвижная фаза.... или типа иди туда, не знаю куда, принеси то, не знаю что.... Как сырьё-то обрабатывается/чистится?

Если конкретно, то хотелось бы определить в растительном сырье полифенольные соединения - флавоноиды, дубильные, кумарины и пр.

ни один нормальный специалист, насколько я знаю, на таких условиях и не понятных для специалистов бонусах с этой темой связываться не будет ...
dd

да... и таких спецов в России с нормальными приборами считанные единицы... обращайтесь напрямую к ним ...
dd

колонну забьёте своим "сырьём" и всё. Хотя, даст Бог, можете ещё и капилляр ES забить, если совсем повезёт и останутся липиды... Потом и DMSO не поможет.
У вас экстракт в виде прозрачной жидкости имеется? или только трава на грядке? какова стадия разработки протокола экстракции вашей смеси флавоноидов? я спрашиваю, потому как сидел на хроматомасс несколько лет и не совсем пока представляю, о чём с Вами конкретном может идти разговор. Или Вы хотите, чтобы всё сделали за вас там по полному циклу от травы до комплексного описания компаундов в экстракте? Вы представляете, сколько это может стоить (приборное время этих масспеков ОЧЕНЬ дорого)? Вы всё ещё уверены, что Вам хочется расстаться с кучей денег ради потенциального БАД?


потому вам и не отвечает никто, потому как работы на месяц-другой, а пользы и даже намёков на пользу не планируется. С нечёткими задачами в этой области не работают. Просто очень дорого, а социализм уже давно прошёл.

Ну конечно же никто не предполагает забивать в колонку сырье
Как такой вариант: сырье чистится от липидов петролейным эфиром, затем хлороформом. Далее извлекается комплекс полифенолов и нек-рых других в-в 70%-м этанолом. Полученное извлечение обрабатывается этилетатом. Будем считать, что состав данной этилацетатной фракции наиболее полно отвечает составу полифенолов собственно растения и при этом содержим минимум балластных веществ. Как вы считаете, такая сумма подлежит анализу на хромассе?

Уважаемые, про травку заговорили! А не в курсе, в Ру, гликозидами и выделением=сушкой (крупномасштабной) не занимается кто? Нужно сырье типа сапонина, аллохразида, гипсофилина .... Спасибо!!!

Однозначно да. Такой экстракт любой согласится загрузить на колонну (по крайней мере, думаю что любой). Я сам работал только с протеинами, самый маленький из которых был 26 аминокислот длиной, но должен сказать общее стандартное условие для вашего экстракта, какую бы вы колонну не использовали: он должен быть стабилен и абсолютно прозрачен в стартовом загрузочном буфере на колонну. Хотя,.. и такие экстракты иногда их портят, но с этим риском уже ничего не поделаешь.

В Вашем случае, думаю, Вам надо попробовать, что будет с экстрактом в 95%, 90%, 80% и 50% ВОДНОМ растворе, имея оставшийся процент на ацетонитрил или, на худой конец, ваши начальные 70% этанола. Увеличте в экстракте процент воды по максимуму, проще говоря, но не в коем случае не в ущерб стабильности. Лучше быть в 5-10% от границы преципитации органики в экстракте.
Просто, я думаю, в вашем органическом экстракте ваши полифенолы могут не прилипнуть к колонне и выход во фракциях будет недостаточен. Если растворитель экстракта по большей части органический, то колонна на пути - не сработает и ничего не задержит. Соответственно,.. самое лучшее, если ваш экстракт окажется стабильным при 5-10% мобильной органической фазы. Но это - слишком благоприятный исход. Затем, стандартно, - анализ проточной фракции, затем - сошедшие пики. На самом деле, я бы сначала посмотрел на профиль сошедшего с колонны, собрал бы все фракции на ОТДЕЛЬНОМ HPLC, а ПОТОМ уже по отдельности отдавал бы на масспек. Это - намного дешевле и люди обычно не шугаются . По поводу того, где... Попробуйте масс-спек ИБХ, если им это будет интересно (095) 336-0777. Если там не заинтересуются (там много всего произошло без меня за прошедшие 4 года и я уже не в курсе, кто там и что делает и имеется ли возможность Вам помочь), обратитесь в масс-спек подразделение ИБМХ (телефона не знаю, но, думаю, хроматомасс там тоже может быть и там определённо этим могут заинтересоваться). Если Вам везде откажут, я могу узнать на нашей массе, но это будет дорого и маловероятно вообще решить проблемы с таможней. Не любят они летучие и ядовитые органические растворители разрешать перевозить.

О, да, совсем забыл. Нужно ещё этот экстракт максимально сконцентрировать, но опять же, не в ущерб стабильности и прозрачности. Для колонки хроматомасс (аналитической) вам не желательно иметь объём экстракта больше объёма колонны. Хотя это - нежёсткое условие. Просто, если будет большой загрузочный объём, будет намного ниже выход веществ в пиках. Хотя, я могу сказать, что для колонки объёмом 1-5 мл можно ещё более-менее безопасно иметь 10-50 мл раствора груза-экстракта. Это - уже нехорошо. Лучше иметь объём экстракта не более объёма матрицы колонны (правило чисто эмпирическое, говорю только по своему опыту, поправьте меня, если я ошибаюсь, пожалуйста). С низкомолекулярной органикой может быть всё по-другому, потому как на колонне всё всегда ведёт себя по-разному. Успешный результат прилипания может отсутствовать даже из-за следов некоторых соединений в экстракте. Тут уже надо пробовать.

Удачи и успехов!

А собственно говоря, почему нельзя собранные фракции отдать на NMR? Неоспоримое достоинство масспека - низкие пределы обнаружения, но если вы выделяете вещества из растительного сырья, то у вас не должно быть ограничений в количестве образца. Можно выделять хоть ведрами. Во-вторых, определение структуры вещества по NMR спектру гораздо более тривиально, чем из масс спектра. Если ваши вещества имеют разветвленное строение, а не линейное, как пептиды, то точное определение структуры может оказаться затруднительным. В-третьих, NMR спектрометры гораздо распространеннее и доступнее, чем масспеки.

Недавно был на выступлении одного товарища из Манильского университета на Филлиппинах, организации не очень богатой. Так вот, они довольно успешно идентифицировали растительные метаболиты (какие-то стероиды) с помощью NMR с предварительным хроматографическим фракционированием. Затем они поддтверждали данные NMR с помощью масспека и уже потом, использовали масспек для определения компонентов с концентрацией слишком низкой для NMR анализа. Идея была в том, что минорные компоненты часто структурно близки к мажорным компонентам (например, разница в одну метильную группу). Это значительно облегчило интерпретацию масс спектров минорных компонентов, так как масс спектры мажорных компонентов и их структуры уже были известны из данных NMR.

Я вообще полностью согласен с подходом, ЯМР и массспек - зачастую в таких задачах комплиментарны и помогают расставлять по местам и идентифицировать функциональные группы, которые вырождены друг с другом в соседнем методе.

Но только вот следует учесть, что интерпретация ЯМР спектров органики, особенно ароматики с большой вырожденностью сигналов протонов в кольцах - не такая тривиальная задача, как анализ просто массы по массспеку-базе данных соединений (+анализ масс возможных заместителей по дельте к базовой массе). Хотя, и для масс и для ЯМР спектров этой органики есть идентификационные атласы и базы данных.
Однако, я бы осторожно заметил, что всё-таки увидеть одну циферку массы и идентифицировать соединение, с последующим подтверждением его структуры ЯМР - проще и обычно быстрее. Потому как многие известные биоорганические соединения имеют чёткую и невырожденную молекулярную массу. Хотя, бывают и досадные и хорошо спрятанные сюрпризы.

Мы собственно, люди непритязательные Нас даже ВЭЖХ впринципе устроит, если знать у кого есть соответствующий прибор, и главное, набор свидетелей.

Не сочтите за грубость, а что у вас вообще есть, кроме травы, этанола и энтузиазма? Слабо представляю себе фармакологические исследования хотя бы без ВЭЖХ.

Судя по описанию вашего проекта, вам нужно 50-300 тысяч долларов инвестиций, чтобы начать этот проект с нуля. Равно ли это коммерческой выгоде от БАДов?

не, ВЭЖХ приличный аналитический с парой-тройкой колонок стоит примерно 35000. Они сейчас сильно подешевели, т.к. технологии улучшились и конкуренция обострилась. Даже у нас их делали, "миллихром" тот же взять. Хотя, не знаю, может уже всё и развалили. Это было бы дешевле.

Да, если интересуте определенный круг целевых мишеней, то ВЭЖХ, наиболее простой и эффективный вариант... В это плане, я бы все таки еще раз посоветовал Вам зайти на anchem.ru - там как раз рядом с Вами, в Краснодаре, классные спецы есть, думаю с ними можно будет взаимовыгодное взаимодействие обсудить...
Ну, свое болото еще похвалю - можно в конце-концов ГХ/МС дериватов интересующих метаболитов попробовать... но это так... , ВЭЖХ в плане вторичных конечно сильнее рулит, чего и говорить...

Ластоногий правильно говорит надо идти на: anchem.ru
и там искать....

Пятигорск!
Неужели так бедно живете? Просто кошмар какой-то описывате. Мало того. Вы, господа, еще и лентяи. Куркин в Самаре запросто чистит полифенолы в условиях провинциальной лаборатории. Колонка (самонабивная или стандартная), ТСХ (полуколичественный анализ), кристаллизация/перекристаллизация (выделение индивидуальных веществ из вытяжки), а затем - в Москву, в ВИЛАР - на ЯМР, масс-спек и т.п.
У него диссертации народ как блины печет.
Здесь совета не просите, "зажиревшие фундаментальщики" (не обижайтесь, коллеги ) вашей провинциальной нищеты не поймут.

Если хотите совета, то - тел. кафедры фармакогнозии СамГМУ:
8...(846)-260-33-59.
Обращаться к проф. Куркину Владимиру Александровичу (зав. кафедрой) - это если официально. Или - к Браславскому Валерию Борисовичу (если менее официально). Последний отвечает на кафедре за ВЭЖХ.

Я бы не сказал, что зажиревшие фундаментальщики нищеты не поймут, просто для качественной и воспроизводимой очистки нужно не просто самонабитая колонка, но и тот, кто знает, как её набивать. А как только такой товарищ исчезает - весь протокол идёт в одно место во время первой же попытки воспользоваться им другого человека (вроде даже - бывшего ученика).

Колонка - это не главное, главное - это хороший градиентный насос. А эта штука - дорогая и гораздо более сложная в кустарном изготовлении. Она или есть, или нет. А если её нет, то и ВЭЖХ не возможна. Тут велосипедный или дачный водяной насос не поможет.

Кристаллизация и перекристаллизация - это очень хороший совет. На это никаких денег особо не надо и воспроизводимость хорошая. Если только что-то с чем то не захочет КОкристаллизоваться и привести к анализу артефактного соединения в ЯМР (массспек не обманешь).

А не подскажете координаты спецов в Краснодаре?
Спасибо.