Полная версия страницы  English  

stem cells для дитяти

Cadmium, 08.08.2005 11:57
Назревает крупное событие - кажется, скоро я стану папой shuffle.gif
Проснувшийся (могучий и древний) отеческий инстинкт толкает на немыслимые поступки ради родного дитяти. А именно, хочу заморозить стволовые клетки из пуповинной крови впрок. Ну мало ли, пускай лежат про запас.
Прикинул тут, однако... от 2 до 3 килобаксов - это легальный путь через фирмы обеспечивающие подобные услуги населению. Держат до 18-20 лет, порядка $125 в год за расход азота smile.gif
Не менее древний и могучий инстинкт сохранения (сбережений) шепчет вот что: сделать забор крови (не дать не могут - birth plan!) в сертифицированные пробирки для крови, быстро в лабу (5 мин на машине), открутить, собрать клетки, разбавить сывороткой и DMSO и - в криохранилище. какой-никакой а все-таки backup.
хотел узнать мнение научного сообщества. не осудит ли, родное.

PS а если кто уже прошел через бюрократию с пуповинной кровью, то хотелось бы услышать таковой опыт.
Дядя ФАКСер, 08.08.2005 12:58
(Cadmium @ 08.08.2005 09:57)
Ссылка на исходное сообщение  
Не менее древний и могучий инстинкт сохранения (сбережений) шепчет вот что: сделать забор крови (не дать не могут - birth plan!) в сертифицированные пробирки для крови, быстро в лабу (5 мин на машине), открутить, собрать клетки, разбавить сывороткой и DMSO и - в криохранилище. какой-никакой а все-таки backup.
хотел узнать мнение научного сообщества. не осудит ли, родное.

PS а если кто уже прошел через бюрократию с пуповинной кровью, то хотелось бы услышать таковой опыт.

А отсортировать? Забыл? smile.gif
AVL, 08.08.2005 16:27
кстати, кто-то может привести РЕАЛьНЫЕ примеры, когда эти замороженные стволовые клетки (сохраненные в компании) помогали больным детям?
Cells-nnm, 08.08.2005 21:46
to Cadmium -
дело хорошее и благородное и безусловно стоит это делать, если вам позволяют финансы.
вероятность того что эти клетки понадобятся для лечения вашего будущего ребёнка при условии что он рождается здоровым = 1: 1000 - 1: 200 000, т.е. мала
однако эта вероятность возрастает с каждым годом, потому как увеличивается список заболеваний, при которых применение клеток ПК может быть выгодным, особенно список негематологических заболеваний (это перспектива), кроме того есть вероятность, что эти клетки могут понадобиться кому-то из родственников при совпадении по HLA или могут быть проданы.

В любом случае - хранить ПК - дело добровольное. Вы можете сдать её в банк персонального хранения (коммерческий) или банк-регистр (бесплатно) - для кого-нибудь (HLA-база данных для лейкемических центров). Насчёт цен вы явно загнули. Мировой стандарт в частных банках на сегодня:
процессинг - 900-1500 баксов, ежегодная плата - 70-140. Банков много, выбор большой, в зависимости от вашей локализации. Разница между банками - методы процессинга, хранения и ценовая политика. В мире около 100 частных банков, около 40 в США.
если вы в Москве, то можно обратиться -
www.gemabank.ru
www.cryocenter.ru
www.floramed.ru

в США рекомендую -
www.viacord.com (nasdaq: VIAC)
www.cryo-cell.com
www.cordblood.com

Поскольку вы биолог, безусловно клетки можно выделить самому
обычный градиент на фиколле и коллекция интерфазы, морозятся мононуклаеры
2-3 криопробирки и в танк и все дела!

to дядя Факсер - при банкировании клетки ПК не сортируются - в этом нет никакого смысла
есть смысл что-то делать после разморозки мононуклеаров, а именно - сортинг, экспансию in vitro и т.д.

Вопрос только в технике сбора ПК - 1. вам нужно получить разрешение в роддоме о том что вы сами соберёте ПК (это не просто), 2. прочитать все мануалы по коллекции ПК и быть готовым к сбору (стоять с готовым китом)

to AVL -
TRANSPLANTATIONS OF STORED UMBILICAL CORD BLOOD FROM PRIVATE BLOOD BANKS: ANALYSIS OF WORLDWIDE EXPERIENCE FROM 52 CASE REPORTS BETWEEN 1993 AND 2004

Volker R. Jacobs, Markus Niemeyer, Nina Gottschalk, Marion Kiechle

Frauenklinik (OB/GYN), Technical University Munich, Munich, Germany

Objective: Since introduction of private umbilical cord blood banking in the
early 1990s at least 52 documented transplantations of stored umbilical
cord blood have been performed between 12/1993 and 09/2004 worldwide. In a review we analyze and summarize this worldwide experience so far. Method: Analysis of data bases, as well as Internet and Medline search for case reports of privately stored umbilical cord blood transplantations. Results: From 12/1993 to 09/2004 52 case reports were found. The average recipient age was 6.1 (0.5-43.6) years, the gender distribution was even (25 male, 26 female, 1 unknown). HLA-status was 6/6 (n=25), <6/6 (n=6) and unknown (n=21). Average time of storage was 14.9 months (1- 69) (n=51), blood volume 85.2 ml (14-168), with MNC 7.0 x 108 (1.1-15.1) (n=3) and CD34+ 4.27 x 106 (n=31). Autologe transplantation was performed in 6 patients (11.5%), in 45 on siblings (86.5%) and in 1 on a child’s parent (1.9%). Whole blood was given in 10 cases (19.2%) and separated blood in 40 (76.9%). CB bank was located in the USA 48 times (92.3%) and in Singapore, Mexico, Canada and Brazil 1 each (1.9%). Indication for allogenic transplantation (n=46) were ALL (n=20), AML (n=6), CML (n=2), Fanconi anemia (n=4), sickle cell anemia and thalassemia (n=3) each, and 1 each of Blackfan Diamond anemia, chronic granulomatous disease, Hurler syndrome, MDS, severe aplastic anemia, Wiscott-Aldrich syndrome and xlinked hyper IgM syndrome. Indication for autologe transplantation (n=6) were severe sickle cell anemia (n=3), neuroblastoma IV (n=2) and retinoblastoma (n=1). Engraftment is documented as successful in at least 34 cases (65.4%), remains unknown in 17 (33.0%), 3 patients (5.8%) deceased. Conclusion: This series of cord blood transplantations from private cord blood banks document its medical application. Analysis shows a wide range of indications for cord blood transplantations. However, verification of medical indication could not be performed and long-term outcome is currently not available. To increase demand for private blood banking, future indications, e.g. in regenerative medicine or for tissue engineering, have to be developed to convince societies and health insurance of its intended purpose and to pay for their service.

материалы ISSCR-2005 абстракт № 476
http://www.isscr.org/meetings/index.htm

Полезно читать:
http://celltranspl.ru/forum/viewforum.php?f=22
http://celltranspl.ru/journal/publications/?MESSAGES[1]=SHOW_PUBLICATION&PUBLICATION_ID=812
http://www.cells-nnm.ru/news/2004/06/31.html
E., 08.08.2005 21:58
2 Cells-nnm:
а европейские не подскажешь?
Cells-nnm, 08.08.2005 22:02
to E -
кое-что есть здесь -
http://stem-cells.ru/banks/index.html?disp=notfull&id=3.4
E., 08.08.2005 22:26
(Cells-nnm @ 08.08.2005 22:02)
Ссылка на исходное сообщение  to E -
кое-что есть здесь -
http://stem-cells.ru/banks/index.html?disp=notfull&id=3.4


спасибочки. beer.gif
сохраню на будушее smile.gif
Cadmium, 09.08.2005 01:21
to Cells-nnm:

меня интересует больше возможность выделить самому.
Насколько я понимаю, банки не процессируют клетки (например, подращивают in vitro), а только отдают замороженные сэмплы заинтересованной стороне. Вопрос стоит в том, насколько "самодельные" сэмплы легитимны, т.е. примут ли их в дальнейшую работу? И, кстати, кто такую работу производит?
Cadmium, 09.08.2005 01:29
А еще, чисто практический вопрос:

а в чем замораживать-то? DMSO 10%, сыворотка 20%, DMEM 70% пойдет?
Cells-nnm, 09.08.2005 08:16
Процессинг ПК в банках включает этапы от доставеки крови до помежения криопробирки (мешка) в танк с азотом, т.е. удаление эритроцитов и выделение мононуклаерной фракции. Экспансия гемопоэтических клеток ex vivo после разморозки - это уже навороты и банки могут этим заниматься если владеют технологией и могут это продавать как уникальную услугу.
Что значит образец нелегитимный?
Понятно что если ты его заготовил сам без соблюдения стандартов (которые устанавливаются рядом организаций), то ты не сможешь его сдать или продать в регистр, а коммерческому банку твой образец вряд-ли будет нужен
ты же его для себя делаешь - если пригодится, говоришь врачу в клинике, что вот есть мол - сохранил и все дела...
возможно через какое-то время у банков появится услуга для всех желающих (левых) "наращивания гемопоэтических клеток образца после разморозки", сейчас пока такого нет.

Сейчас для вас наиболее важно качественно заготовить ПК - поэтому особое внимание технике - очень важен объём образца (многие банки отказываются от образцов V<80 мл.) оптимально было бы взять >100
сыворотку в freezing medium можно доводить до 50%, DMEM и RPMI - пойдут, DMSO -10,
хотя мой личный опыт по заморозке клеток ПК небольшой

удачи
Дядя ФАКСер, 09.08.2005 10:40
(Cells-nnm @ 08.08.2005 19:46)
Ссылка на исходное сообщение to дядя Факсер - при банкировании клетки ПК не сортируются - в этом нет никакого смысла
есть смысл что-то делать после разморозки мононуклеаров, а именно - сортинг, экспансию in vitro и т.д.

Это где-как.
У нас в фасилити перед банкированием сортировали (AutoMACS+ WholeBlood beads)
Дядя ФАКСер, 09.08.2005 10:42
(Cadmium @ 08.08.2005 23:29)
Ссылка на исходное сообщение  А еще, чисто практический вопрос:

а в чем замораживать-то? DMSO 10%, сыворотка 20%, DMEM 70% пойдет?

http://www.biocompare.com/itemdetails.asp?...1045&catid=6470
AVL, 09.08.2005 11:17
(E. @ 08.08.2005 19:58)
Ссылка на исходное сообщение  2 Cells-nnm:
а европейские не подскажешь?

Germany - www.vita34.de
Cadmium, 09.08.2005 21:53
Спасибо за дельные советы.
В роддоме готовы собрать кровь в пробирки. Пробирки есть сертифицированные, с гепарином. Также есть какие-то навороченные пробирки для выделения мононуклеаров, с какими-то вставками внутри. Фиколл сделаю сам.
Пожалуй, последний насущный вопрос: сколько крови брать? Хотя бы порядок. Я понимаю, больше 50 мл не получится, но, скажем, 10 мл достаточно?
И еще - сколько можно хранить кровь перед выделением, а то не хочется жену бросать сразу после родов...
Cadmium, 09.08.2005 21:58
в абстракте пишут про 80 мл крови! eek.gif
Дядя ФАКСер, 09.08.2005 22:05
Сколько собирать? А всю, что будет
Чем больше- тем лучше.
Ибо CD34+- достаточно редкий сабсет ( даже в cord blood)
гость: g, 09.08.2005 22:56
Возможно, имеет смысл заморозить клетки на собственнои сыворотке ребенка+10% DMSO. Чем меньше постороних ингридиентов, тем лучше.
Дядя ФАКСер, 09.08.2005 23:35
Разумно- но вот только при чем здесь посторонние ингридиенты???
После дефростинга- все равно (переж экспаншеном) всегда пару отмывок делаешь, как минимум.
J, 10.08.2005 00:08
я тоже считаю, что посторонних ингридиентов лучше избежать,
с другои стороны кто знает как клетки хранятся в фетальнои человеческои сыворотке?
гость: g, 10.08.2005 01:39
Мы замораживали клетки крови взрослого человека в его же сыворотке, проблем не было.
гость: g, 10.08.2005 01:49
А если вы собираетесь делать экспаншен, тем более следует вести их на роднои сыворотке, а не на телячьей. Впрочем, большого значения это не играет, делайте как вам удобнее.
Дядя ФАКСер, 10.08.2005 12:49
Human serum для культивирования - всегда заказать можно ( в той же самой Sigma, например)
Cells-nnm, 10.08.2005 17:00
to Cadmium -
можно пробовать морозить на своей - аутосыворотке (тогда зачем покупать? - to Факсер), но на сегодня все данные по криоконсервации клеток ПК получены на FBS
я имею в виду сохранение способности гемопоэтических клеток к колониеобразованию через 15-20 лет после крио-.
Поэтому все протоколы и стандарты предусматривают FBS - вопрос изучен. Но если вы экспериментатор - вперёд!

Объём образца - это самое критичное! Нужно забирать всё по максимуму, 30 мл. брать нет никакого смысла! ориентир на 100 и >. Потому как вам нужны в этом образце гемопоэтические клетки, а их содержание в цельной ПК 0.1-0.3%. И только эти клетки нужны для лечения чего-либо и энграфтмента в костный мозг хозяина, например после миелооабляции при лечении лейкемии. Статистика гооворит о том, что количество CD34+ в образце объёмом 100 мл. достаточно для транспслантации субъекту весом 50 кг., не больше. Т.к. тер. доза 1-5 млн. СD34+/кг. веса.

Хранение образца до процессинга - пинцип чем быстрее тем лучше, чище интерфаза на фиколле и богаче клетками. Допустимо до суток, я процессировал и 2-х суточные образцы хранимые при RT, но при этом интерфаза очень контаминирована эритроцитами и часть клеток теряется в градиенте.

Какой метод выделения MNC - в принципе не важно, задача заготовить максимум клеток, если вы уверены в коммерческих пробирках (кит) для выделения момнонуклеаров - юзайте, если нет - фиколл и классика.
Ориентиры по количеству - в 100 мл. содержится 100-500 000 клеток интерфазы
поэтому сориентируйтесь сколько вам понадобиться криопробирок, лучше V= 3 или 5 мл. каждая
Cadmium, 13.08.2005 06:42
Спасибо всем, но что-то я передумал. Сломался! redface.gif Позвонил и записался в Viacord. Как и говорил, со всеми расходами набегает 2 килобаксов frown.gif

Главным аргументом отмены собственного производства stem cells явилось непостоянство нашей постдочной жизни. кто знает, что будет через год. а через два? не возить же с собой пробирки из лабы в лабу. А так, поиграться, ощутить важность совершаемого, и забыть - тогда и не стоило бы начинать.

В виакорде меня обработали как надо smile.gif
Говорят, храним в мешках, это сертифицированный FDA способ. А в пробирках это как бы и не совсем по правилам (?) Ну, я не спорю. Но только не понял прикола: мы же храним культуры в пробирках и ничего, все живы. А что за мешки такие?
больше всего они кичатся тем, что якобы они единственные могут подращивать клетки in vitro из сэмплов. Все запантентовали, другим банкам в знании отказывают. У них еще налажена сама процедура введения клеток, они там с госпиталем работают на пару. В общем, полный фарш. Да, на случай банкротства ребята подстраховались, у них продуманная система аварийной передачи юрисдикции. Банк будет поддерживаться тамошним университетом.

В общем, родительский инстинкт победил. Посмотрим, смогут ли они забрать кровь, а то нам уже рассказали как когда-то курьер не доехал, не довез...
Cells-nnm, 13.08.2005 07:52
Viacord - думаю один из лучших что есть в США,
банк принадлежит корпорации Viacell
http://www.viacellinc.com
с крышей в Гарварде -
http://www.viacellinc.com/about_med_scientific.htm
и других университетах

мешки (скорее всего Baxter) и криопробирки - всё это разрешено к использованию FDA в криобанках. Мешки - один из стандартов в blood processing, разного объёма, очень удобны на 50 мл. из American Red Cross или AABB. Продукты афереза, мобилизированная кровь и проч. обычно пакуют в смеси аналогичной при заморозке в криопробирках: клеточная суспензия + среда+ сыворотка + криопротектор. Просто объёмы - если надо морозить пол-миллиарда клеток - то удобнее сразу в 1 мешке 50 мл, чем в 25 криопробирках по 2-3 мл., и если эту кровь потом будут переливать, то с мешком проще работать.

О экспансии после разморозке в Viacell можно почитать здесь -
http://www.viacellinc.com/products_hematopoetic.htm
эта не единственная компания, которая заявляет, что "может", просто viacord - viacell самая знаменитая и громкая.

При "обработке" в компании будьте внимательны - не забывайте что это бизнес!
Cadmium, 14.08.2005 04:36
да , бизнес у них неплохой. Viacell производит впечатление солидной конторы. Пожалуй, стоит к ним обратиться, когда придет время менять рабочую дислокацию smile.gif
про мешки - сплошное недоразумение. Это что же получается, размораживают они мешок на 50 мл и сразу инфузию делают? Так там же порядка 50% дохляка будет! А то и все 90. Вообще, по опыту личному - чем меньше объем заморозки, тем выше выживаемость. Не мудрено, что процент низкий процент приживаемости получается...
Однако, повторюсь, меня подкупает их способность к манипуляциям in vitro. Хотя бы посмотрят ЖИВОЕ ли оно там, прежде в людей засовывать. То что они "размножают" стволовые, это ерунда, конечно. Скорее, пролиферируют слабо дифференцированные предшественники с возможностью последующей плюрипотентной (гематогенной) дифференцировки. но тем не менее, это все ж лучше, чем просто держать образец в азоте.

Вообще-то хотел спросить, что происходит, если частный образец подходит кому-то "постороннему". Предусмотрены какие-либо компенсации владельцам сэмпла (много-много денег)? А бэкапа, похоже, у них нет.
Cells-nnm, 15.08.2005 08:21
Мешки им видимо удобнее для бизнеса, ряд банков пакует в криопробирки....
Экспанисия - да не говорят каких гемопоэтических, с CD34+ пока проблемы, а прогениторы - пожайлуста, сколько угодно, но вам нужны то именно CD34+ или более ранние из гемопоэтика.

Не факт, что вы отот образец сможете продать за ненадобностью в будущем. Во-первых HLA-типирование в частных банках делают редко (это же банки персонального хранения!), а зачем - 200 баксов? Не знаю делают ли в Viacord? сомневаюсь. Если даже вы сделаете HLA, то ваш банк должен быть в контакте с базой данных с регистрами, которые ищут образцы для клиники лейкемий. Вероятность, что именно ваш образец окажется уникальным по HLA, вам позвонят из регистра и предложат за него деньги - ничтожно мала.
Продажа отказных образцов из частных банков в настоящее вроемя не практикуется, но возможно в будущем такой бизнес будет набирать обороты, тогда частным банкам будет выгодно типировать.
Это — лёгкая версия форума. Чтобы попасть на полную, щелкните здесь.
Invision Power Board © 2001-2012 Invision Power Services, Inc.