Господа, подскажите пжлста как разрушить (лучше) мембраны клеток(человек, легкое эмбриона, клетки линии W1-38, трансформированные SV-40). Задача: измерить различные показатели "внутреннего содержимого клетки", например АОА. (извиняюсь за тупые определения, но от биологии далека...к сожалению)

А какая у вас конкретно задача?
Может все таки не "разрушить", а "пермеабилизировать" для внутриклеточного окрашивания?
А может- вам и самоинтернализующиеся зонды подойдут (если, например, вы митохондриальный потенциал детектить собираетесь или что подобное).

P.S. Что есть "АОА"?

Красить мне ничего не надо. Нужно разорвать (разодрать, убрать, порвать и т.д. ну, не знаю я как правильно называется) мембрану и померить антиоксидантную активность общую!
А что такое "пермеабилизировать" и "самоинтернализующиеся зонды" ?

"антиоксидантную активность" обычно оценивают по изменению митохондриального потенциала.
Ничего "разрывать" тут не требуется- спокойно грузите клетки зодном- и смотрите. На проточнике или флуоресцентном микроскопе.
Матчасть- тут:
http://probes.invitrogen.com/media/pis/mp03168.pdf

P.S. Как можно заниматься чем-либо, не разобравшись в теме? Где дело то происходит?
Типа "студенотов на амбразуру" кинули, что ли?

P.P.S. Первеабилизовать означает- продырявить (дабы сделать внутриклеточное содержимое доступным для манипуляций)
Смоинтернализующиеся зонды- это зонды (метки), которые могут сами проникать в клетку и там закрепляться в нудном месте ( без необходимости пермеабилизации оной).

"антиоксидантную активность" обычно оценивают по изменению митохондриального потенциала

Вау, новое в биологии. В ссылке рассказано как измеряют мембранный потенциал, но о матчасти по поводу нового в биологии нет.
Интересно, а чем занимаются в клетке перексисомы?

"антиоксидантную активность общую" меряют в сыворотке или плазме.

Измерить такую активность в клетке затруднительно. Что считать общей?
Включать активность ферментов пероксисомы или нет. Включать работу внутренних ферментов митохондрий?
Если в случае крови мы видим интегральный показатель организма, то в клетке с её компартментализацией (разделенность на независимые секции) что даст интегральный показатель.
Впрочем, проще всего: берёте стандартный метод для крови, дырявите мембрану скажем 0,1% Тритоном X100 и будем Вам счастье.

Я определяю исключительно водорастворимые низкомолекулярные антиоксиданты клетки, ферменты и жирорастворимые не в счет. Определение происходит с помощью потенциометрического метода. Предлагаемый метод Red-Ox потенциометрии основан на взаимодействии антиоксидантов с медиаторной системой. Оценивая изменение концентраций окисленной и восстановленной форм системы, происходящие при взаимодействии с антиоксидантом, можно измерить изменение потенциала данной системы. Это и есть аналитический сигнал.

От задач зависит, ничего нового.
Кстати, с пероксисомами тоже можно весело поиграть на проточнике:
http://mic.sgmjournals.org/cgi/reprint-embargo/140/11/3161
http://cat.inist.fr/?aModele=afficheN&cpsidt=17616330
И на LSC:
http://tpx.sagepub.com/cgi/content/abstract/33/1/86

Ничего нового? Дяденька, приведите ссылку где антиоксидантная активность равна мебранному потенциалу. Все остальное... не имеет к этому отношение.
Мы же не в Беседе, где Вы и Ваши гоблины лепят горбатого

Тогда в буфер для измерений добавьте Triton X100. Поиграйтесь с концентрацией от 0,1% до 1%. Чем меньше тем лучше. При малой концентрации разрушается только внешняя мембрана, при большой разрушается мембрана митохондрий.

"равна". Не "равна", а "связана". Один из методов оценки.
Вообще, темин "антиоксидантная активность"- левый какой-то. Почти как "пролиферативный потенциал"

Спасибо , прада сначала нужно точно показать, что Triton X100 сам по себе не влияет на Медиаторную систему

1. "антиоксидантную активность" обычно оценивают по изменению митохондриального потенциала.
2. ""равна". Не "равна", а "связана". Один из методов оценки".

Первое утверждение более адекватно понятию "равна", а не "связана". Дайте ссылку, где мембранный потенциал один из методов оценки антиоксидантной активности.
Мне действительно интересно, как можно оценивать, например, активность ферментов пероксисом с помощью мембранного потенциала митохондрий.

Ну вот, например:
http://www.sciencedirect.com/science?_ob=A...d0fbbd8fe5ef704
http://toxsci.oxfordjournals.org/cgi/conte...bstract/48/1/82

В первой статье ПОЛ и мембранный потенциал измеряются отдельно.
Глобальное открытие современности: через трое суток в сперме и ферменты ПОЛ не работают и мембранный потенциал падает! И Вы из этого открытия века делаете вывод, что можно активность ферментов пероксисом измерять с помощью MMP?
Вторая статья вообще о влиянии пролифераторов пероксисом на митохондрии.
The results of this investigation demonstrate that although most, but not all, peroxisome proliferators interfere with mitochondrial bioenergetics, the specific biomolecular mechanism differs among the individual compounds.
Итак, большинство, но не все яды - пролифераторы пероксисом вызывают падение MMP. Это по мнению авторов механизм пролиферации пероксисом6 типа когда митохондриям кирдык и у них нет мембранного потенциала, тогда клетка штампует пероксисомы, чтобы перерабатывать жирные кислоты.
Ну и как при этом механизме мембранный потенциал митохондрий покажет уровень антиоксидантной активности?
Вывод:
В этих статьях не показано, что антиоксидантную активность можно измерять измеряя MMP. Не мучьтесь, дяденька, сказали чушь, так признайте.

Тем более, как оказалось, автору вопроса нужна активность низкомолекулярных антиоксидантов цитоплазмы, а уж её тем более MMP не измеришь.

Коллеги, кто-нибудь занимался изучением Антимикробных пептидов на бактерии ?!