Подскажите пож-ста, кто в Москве или МО работает с аденовирусными конструкциями, системы pAdeasy, Adeno-X™ Expression Systems 2 , и так далее.

У меня не проходит рекомбинация в BJ клетках (системы pAdEasy-pAdTrack-CMV), все перепробовали, ну уже не знаем, что и делать.
у кого были подобные проблемы?

я не в москве, но пару десятков этих адизи пришлось нашлёпать.

рекомендую первым делом вместо BJ сделать так называемые [Adeasier] клетки - с пласмидой вируса - и електропорировать только шатлом.

http://www.coloncancer.org/adeasy.htm

а вообще, опишите поподробнее что и как вы там делаете...может, линеаризировать забыли...или еще какую мелочь

вот я сейчас и пытаюсь сделать эти AdEasier клетки, потому как последнее, что осталось неучтенным-непеределанным, это возможно именно BJ-ки.
какой там забыли линеаризовать....мы уже всеми возможными методами и почистили плазмиды, и концентрации меняли, и чего только не делали.
а с этими клетками получится успешнее?

а что у вас там растет? только большие колонии?

у нас растут маленькие и большие колонии, тольок вот при выделении оказывается, что плазмида в них шаттлная, а не рекомбинатная

а самого Adeasy нету?

если нет, то Adeasier помогут, у вас похоже електрокомпетентные клетки плоховатые.

если нет, то Adeasier помогут, у вас похоже електрокомпетентные клетки плоховатые.

а их можно как-нить "улучшить" из того, что есть в запасе?
вырастить заново на стрептомицине?

трансформируйте только Adeasy, растите на ампициллине+стреп.
проверьте пласмиду, и приготовьте из них электрокомпетентные клетки.

спасибо за помощь.
после трансформации AdEasier cells мне растить только на стрептомицине/канамицине, так как шаттлные (у меня pAdTrack-CMV) имеет канамицин. устойчивость, а стрепто после рекомбинации уйдет из баков?

после трансформации шатлом растите только на канамицине, стреп не нужен.

почитайте на сайте, который я дал, там есть отличная инструкция и обьяснения.

я этот сайт изучила вдоль и поперек, и следую строго инструкциям из статьи Luo, что там приводится.

а можно как-нибудь проверить способность моих баков к рекомбинации? ну, я имею ввиду как-нибудь по-другому?

не надо лезть в дебри. если у вас после ко-трансформации только шатл, значит проблема в эффективности трансформации. попробуйте электропорировать, 50% на канамицин, 50% на ампициллин, и посмотрите сколько тут и сколько там. думаю будет 1:5 примерно.