всем привет! у меня проблема!
измеряю активность ферментов..... есть пробы контрольные - без ингибитора и есть опытные- с ингибитором. в теории активность контрольных должна быть выше , а у меня наоборот . уже несколько раз измеряла - все одно !!!!!!

Все зависит от того - что Вы меряете и как. А пробирки - чистые?

пробирки конечно чистые. мерили активность протеаз и использовали соответствующие ингибиторы, чтобы выявить их подклассовую принадлежность. активность измеряли спектрофотометрическими методами.

Каких, где, как?
Какие?

Здесь сюрпризов быть - не должно, но - нельзя ли по подробнее?


Эт чё ж получаетси , формирование активного центра вследствии частичного протеолиза .

надо выяснить подклассовую протеаз принадлежность с рН оптимумом 2,6; 3,0; 6,2 ; 9,0
Ингибиторы - пепстатин А, ПХМБ, ЭДТА, ФМСФ
метод Кунитца

к раствору ферментного экстракта с буфером добавляем ингибитор , инкубируем 20 мин при 30*С и приливаем субстрат, далее еще 15 минут в инкубируем. После останавливаем реакцию раствором ТХУ. в контроле вместо ингибитора вода.

"к раствору ферментного экстракта "
Экстракт-то откуда?
"Химотрипсин Процесс активации включает расщепление одной строго определённой пептидной связи в молекуле химотрипсиногена, в результате чего происходит конформационная перестройка молекулы белка и окончательное формирование активного центра "

http://bse.sci-lib.com/article119089.html

Это чё? В МГУ начались пересдачи в экстремальных климатических условиях?

Заодно посмотреть:
1) не поглошает ли сам ингибитор (или его продукт с проявителем)
2) не меняется ли рН

препарат содержит ингибитор концентрация которого уменьшается при проведении эксперимента(разбавление) и действие этого ингибитора в данных условиях сильнее изучаемых (например)