Добрый день,
Очень заинтересовала технология получения химерных мышек. Наша лаборатория изуает ген, гомозиготы по которому летальны, хочется получить химерных мышек, у которых небольшой процент клеток имеет нокаут этого гена. Как я понимаю шаги следующие: получаем ES клетки, модификация с помощью shRNA или ZFN, селекция, инъекция в бластоцисты, анализ фенотипа.
Очень бы хотелось пообщаться с кем-нибудь, имеющим опыт в данной области, перед тем как писать протокол для разрешения работы с мышками.
Откликнитесь, пожалуйста!

я наверное чего-то не понимаю, но если у вас "гомозиготные мыши летальны", то живое потомство будет либо дикого типа, либо гетерозигота и
соответственно, на какой стадии ... ген летальный нужно будет исследовать, наблюдая потомство от рождения и до зачатия.
к сожалению, нам делали химерных мышей, но простой рекомбинацией гомологичных участков, конструкцию и скриннинг вели сами...

да и ещё, похоже у нас сейчас именно ген летальный и после проверки последнего потомства, таки и придется заниматься мышиной эмбриологией.

http://www.med.umich.edu/tamc/esoutline.html
http://www.protocol-online.org/cgi-bin/pro...ache.cgi?ID=374
http://www.currentprotocols.com/protocol/cb1912
http://capecchi.genetics.utah.edu/PDFs/160NPwu.pdf
http://www.springerprotocols.com/Pdf/doi/1...=&access=denied
http://www.springerprotocols.com/Abstract/...59259-788-2:185
etc.

Спасибо!
Буду изучать Ваши ссылки.
Мы собираемся вводить в нормальную бластоцисту ES клетки с инактивированым геном, соответственно, инактивация бует примерно в небольшом количестве клеток всего организма. Как вариант мложно использовать индуцибельный Cre, под DOX промотером, и титровать количество инъектированного DOX, но это очень плохой вариант, он нам не подходит.