Кто этим занимается, прошу поделиться подробной методикой. Уже несколько раз переделывала, не садятся и все тут.Заранее благодарна

1% глютар....

Пептид какой длины? И сколько в нем гидрофобных АА, как хорошо он растворим в воде. Какое pI пептида.

Лучше всего ковалентно.
Плашки для твердофазного ИФА предназначены в основном для иммобилизации антител, которые хорошо липнут гидрофобно. С пептидами такое прокатывает не всегда, к тому же часто блокируется их способность связывать АТ из-за стерических факторов, сильного изменения конформации и пр.

интересно как полистирол с глутаром среагирует посмотри формулу полистирола

96-плашки с епокси активированным пластиковым донышком проверял

http://www.poly-an.de/index.php?docid=63&v...lang=en&lang=en

лучше ККК

посадите на хвост лизины и в бикарбонатном буффере пх9 в плашку с "аминреактив" сурфасом

Физик! А мужаки то не знали?
Подождал бы пока автор что-нибудь напишет.

это типа "нуливое приближение" скажи фирму у которой плашки с активированными донышками хорошие

Активированные плашки дороговаты, пытаемся сами как то посалить. Пептид маленький - 10 АК, и pI: 12.48

Вот пытаюсь сейчас глутаровым альдегидом опять))

тогда самый супер - пептид из 10 лизинов

я сорбировал на Nunc Maxisorp из карбонат-бикарбонатного буфера. Правда что был за пептид уже нет возможности вспомнить. Как вариант - пришить на носитель. Либо за концевой амин присобащить биотин, и сорбировать на плашку со Str.

-Пептид маленький - 10 АК, и pI: 12.48
Вай! Какой некароший!

Так хоть одна гидрофобная АА есть?
Лизин хоть один есть или только аргинин?

Если лизина нет, то глютар будет малоэффективен, но попробовать можно.

Есть пролин и аргинин на концах, паспорт начальник должен вот вот мне передать, тогда более подробно узнаю

-пролин и аргинин на концах

Неее, эти пацаны идут лесом.

Если у пептида меньше чем две первичные аминогруппы, то все потуги с глютаром скорее всего ни к чему не приведут. Так как глютар сможет образовывать из них только димеры, но не олигомеры.

Если у вас всего одна, две гидрофобные аминокислоты, да еще если они и разнесены друг от друга, то шансов практически нет.

Если гидрофобных АА хотя бы половина и они располагаются блоками можно попробовать. Сделать буфер с рН 12.5 соли побольше 1-2 моля (можно сульфат натрия) и в таком растворе наносить. Но нет гарантии, что его потом не смоет при изменении условий до физиологических.

Получение олигомеров с помощью бифункциональных сшивок (глютар как один из примеров такого агента) тоже может помочь делу, но для этого необходимо, что бы сшивка происходила по группам, которых в пептиде две и более, в противном случае больше димера получить не удастся.

Ну и остается два варианта.
1) Воспользоваться активированными планшетами
2) использовать коньюгат пептида с белком носителем с тем же БСА(более дорогой вариант коньюгат петида с биотином наносить на планшет сенсибилизированный Stav или Av.

скорее всего "невер юз санта-круз" сказала , что моноклоны антитела делали на "ентот пептид"

Спасибо всем большое за советы!)) получилось получить кое какие сигналы на 2% глутаровом альдегиде, параллельно пытаемся пришить пептид с БСА.