Подскажите пожалуйста, как по данным цитометрии определить число рецепторов на поверхности клетки.
Метод проточной цитометрии мне очень плохо знаком. Сам эксперименты с ним ставить не собираюсь, нужно из статей только получить количественные данные по числу рецепторов.

Уважаемый гость! Вот несколько ссылок по интересующей Вас теме.

1) Flow-Cytometric Determination of High-Density-Lipoprotein binding Sites on Human Leukocytes, G. Schmitz, G. Wulf, T. Bruning, G. Assman, 1987, Clin. Chem.

2) Quantitation of surface CD14 on human monocytes and neutrophils, P. Antal-Szalmas, J.A.G. Van Strijp, A.J.L. Weersnink, J. Verhoef, 1997, J. of Leukocyte Biology.

3) Scatchard analysis of Fluorescent Concanavalin A Binding to Lymphocytes, I. L. Gordon, 1995, Cytometry.

В каждой статье подробно объяснен принцип методики. Особенно рекомендую последнюю работу.
Вкратце метод очень прост: специфический маркер (моноклональные антитела и т.п.) окрашивают флюорохромом, при этом вычисляют количество молекул краски, приходящееся на одну молекулу маркера; на проточнике измеряется интенсивность флюоресценции исследуемого образца и калибровочного образца (например, бус с известным количеством флюорохрома); вычисляют количество экспрессируемых рецепторов.

это возможно, если в статье уже приведены искомые количественные показатели...

Большое спасибо.

Вдогон - из Current Protocols in Cytometry

Quantitative_Flow_Cytometric_Analysis.pdf размер: 284.01 кол-во скачиваний: 349

Вот здесь http://molbiol.ru/forums/index.php?showtopic=398702&st=50 полезная дискуссия на эту тему. Смотреть надо с 73 поста.

смотреть можно, и дискутировать полезно тож ...
а вот если нужно определить число рецепторов на поверхности, то Цитометрия вряд ли может быть методом выбора, если речь не идёт о гетерогенной клеточной популяции.
Потому как можно и высоту небоскрёба измерить при помощи барометра, но проще прибегнуть к методам более точным и простым.

Само собой, кровушка, к примеру.

Вот про точность Вы зря. Да, простым, но про точность стандартных методов вообще говорить сложно.

Общая кинетическая схема процесса зависит от четырех параметров: концентрации антител в растворе, распределения рецепторов по популяции, констант образования и диссоциации комплексов рецептор-антитело. Если вы не определяете три последних параметра, то при определении первого вам надо загнать систему в предельные условия, чтобы от остальных не зависеть. По второму параметру можно условно отвязаться избытком (каким?) антител, по третьему параметру - длительным (каким?) ожиданием завершения процесса. Только при этом надо опять же измерять степень предельности. А вот с четвертым - полная засада. Можно довериться «дядям», которые когда-то, где-то измерили константу диссоциации комплексов и учесть ее влияние, но кто же гарантирует, что ваши условия проведения реакции совпадают с теми, что были у «дядей». Короче, нет возможности определить точность стандартных методов. Можно измерить только воспроизводимость результатов.

кинетические измерения ЛРВ в гетерогенных да ещё и живых системах никогда не дадут представления о числе рецепторов... А оно надо?

http://molbiol.ru/forums/index.php?showtopic=398702&st=50 пост №100



См название темы.

В данной теме исходный вопрос- о рутинной работе с имеющимся китом (кинетические характеристики для которого поизводителем откатаны многократно на стадии QC). Так что, тема исчерпана.

Добрый вечер!
Я - офтальмолог, но в моей научной работе используется метод проточной цитометрии.
Подскажите среднюю стоимость по Москве исследования одного образца крови методом проточной цитометрии. Спасибо.