Господа, помогите пожалуйста с дот-блотом. Необходимо соорудить небольшой дот-блотик, а тут вылезла проблема: антитела работают, но фон такой, что просто ничего невозможно разобрать. Прошу помочь советом. Что мы делаем:
На нитроцеллюлозную мембрану наносятся пробы, мембрану высушивают пару часов, после чего мы ставим ее на блокировку в раствор 5% молока на ПБС-Т. Ставили на 1 час, ставили на ночь, результат один и тот же. Дальше с первичными в 5% молоке ПБС-т, вторичными на 1% молоке, проявка, и... на вроде пробах что-то есть, но фон особо не хуже) Тепрь прошу помочь с тем как быть с блокировкой. Метод менять не можем,, но возможно имеется смысл поменять блокирующий агент? Или как-то предварительно подготовить мембрану?