Полная версия страницы  English  

Растворение белкового осадка

guest: Nataly , 15.11.2011 20:55
Подскажите, пожалуйста, как правильно растворять флотирующий белковый осадок после центрифугирования? Встряхиванием пробирки, покачиванием, переворачиванием, пипетированием...? Если встряхивать, образуется много пены. (Растворяю в сверхчистой воде).
Guest, 16.11.2011 16:31
то что Вы назвали пипетированием выглядит предпочтительней не фоне перечисленного остального. smile.gif А постарше-опытней, то бишь взрослых рядом никого не оказалось? smile.gif
guest: Nataly , 16.11.2011 22:51
К сожалению, нет. smile.gif Спасибо за ответ!
Guest, 17.11.2011 10:40
если нет, тогда (ежели еще непоздно) - полезно осадок - если он большой для пипетирования - "размять" либо стеклянной палкой и/либо в стеклянном гомогенизаторе - хоть это все и "прошлый век" - но полезно для растворения.
NMR-guy, 18.11.2011 02:45
растворять ФЛОТИРУЮЩИЙ осадок ПОСЛЕ ЦЕНТРИФУГИРОВАНИЯ?
guest: Nataly , 19.11.2011 21:11
Да, после центрифугирования проба разделяется на 3 фазы: нижняя - осадок, средняя- жидкая, верхняя - флотирующий осадок. Меня интересует именно верхняя фаза.
NMR-guy, 20.11.2011 07:16
а Вы пробовали сверху добавлять что-нибудь нерастворимое в воде (фенол к примеру, или масло какое-нибудь), потом балансировать и докручивать, чтобы весь флотирующий материал перешел в верхний слой из воды внизу, который потом собрать сверху и использовать? или Вам нужно именно в воде?
shure, 20.11.2011 08:22
может ето жыр?
Guest, 20.11.2011 15:04
Нет, не пробовала, а зачем? У меня осадок над жидкой фазой (насыщенный раствор сульфата аммония) образуется , не плавает в ней.
(shure @ 20.11.2011 08:22)
Ссылка на исходное сообщение  может ето жыр?
Не думаю, что это жир )
guest: Nataly , 20.11.2011 20:25
Прошу прощения, забыла подписаться. Предыдущее сообщение моё.
NMR-guy, 21.11.2011 04:54
мда, я теряюсь тогда, что же еще предложить, раз НАД жидкой фазой, не плавая в ней.

может, тогда это газЪ?
guest: Nataly , 21.11.2011 21:45
Осадок получается... "пенообразный", но чуть плотнее по консистенции, легко разбивается наконечником пипетки на части, не тонет в жидкой фазе, но после снятие наконечником со стенок пробирки плавает над жидкостью, а более мелкие его части - могут плавать в самой жидкой фазе.
NMR-guy, 22.11.2011 19:56
нафик Вам нужно то, что плавает над жидкой фазой и не тонет?
guest: Nataly , 22.11.2011 20:44
Нужно проверить все три фазы.
accelerant, 22.11.2011 23:17
Скорее всего флотируюший слой образуется при солении сухим сульфатом (особенно если достаточно быстро сульфат добавляете). А вот если фракционирование делать насышенным раствором сульфата аммония, то скорее всего никакого флотируюшего слоя вообше не будет. Ну а так, флотируюший надосадок можно попробовать суспендировать в glass-glass гомогенизаторе или пипетированием с использованием positive displacement pipette.
Nataly.K, 26.11.2011 17:55
(accelerant @ 23.11.2011 00:17)
Ссылка на исходное сообщение  Скорее всего флотируюший слой образуется при солении сухим сульфатом (особенно если достаточно быстро сульфат добавляете). А вот если фракционирование делать насышенным раствором сульфата аммония, то скорее всего никакого флотируюшего слоя вообше не будет.

Я высаливаю насыщенным раствором, а не солью, и всё равно образуется флотирующий осадок. При высаливании бОльших количеств белка фл.осадок соединяется с нижним осадком, но по консистенции они различаются.

P.S.: предыдущие сообщения "guest: Nataly" мои.
shure, 27.11.2011 04:40
тритоном или сдсом растворится. как вам сказали - проверьте на форезе чего там такое. может оно вам и не надо. ну или наоборот - надо. скорее всего у вас же задача не стоит "исследование растворимости флотирующих прецепитатов при высаливании сульфатом аммония".
Nataly.K, 27.11.2011 10:46
(shure @ 27.11.2011 05:40)
Ссылка на исходное сообщение  тритоном или сдсом растворится. как вам сказали - проверьте на форезе чего там такое. может оно вам и не надо. ну или наоборот - надо.  скорее всего у вас же задача не стоит "исследование растворимости флотирующих прецепитатов при  высаливании сульфатом аммония".

Проверяла на ИФА. Интересующий меня белок оказался и в верхней и нижней фазах, т.е. в осадках. Растворяла в воде. Если флотирующий осадок можно было растворить, пипетированием (правда 1-2 объёмов растворителя оказалось маловато), то нижний осадок совсем плохо растворялся. Попробую поработать с тритоном или сдс... Спасибо за совет!
guest: OldBuddy , 26.12.2011 14:36
Из чего белок получаете? Мембранный, поди? Не липопротеин какой? Если так, то в нижней фракции у вас, возможно, агрегированная форма и лучше ее не тритоном для начала обработать, а мочевиной или гуанидином. А общем объект надо бы полнее описать, а то будет долгая теоретическая дискуссия.
guest: 123 , 13.06.2022 08:05
Saxon Mullins 123VEGA says she once had PRAGMATIC PLAY romantic dreams of what her 'first time' would ICONIC GAMING be like. In none was หวยปิงปอง she paralysed by fear in a Sydney ปั่นสล็อต alleyway, aged 18, with a 123GOAL man she had met only minutes earlier. Ms 88KTC Mullins has always maintained FC SLOT this incident - in 2013 - was rape. It spurred AMB CASINO her to push for legal 11HILO reform in Australia, after a long court battle ended with a judge finding the man involved did not realise she hadn't consented to sex.
Это — лёгкая версия форума. Чтобы попасть на полную, щелкните здесь.
Invision Power Board © 2001-2024 Invision Power Services, Inc.