Полная версия страницы  English  

Как растворить казеин в буфере?

guest: Ольга , 05.09.2012 18:35
Здравствуйте, столкнулась с такой проблемой, в ряде иностранных статей приводится методика определения активности протеиназ с казеином в качестве субстрата, и во всех методиках его растворяют в том или ином буфере с рН 6,8-7,1, но как показывает практика казеин не растворяется в них, согласно литературным данным растворить его можно лишь в щелочах... как же быть если среда для работы фермента должна быть с рН 7, в щелочной среде он будет неактивен...
vtosha, 05.09.2012 20:19
С гормонами так поступают: растворяют в ма-а-аленькой капельке щёлочи, а потом доводят до бо-о-ольшого объёма. Например, тем же буфером - столько щёлочи буферная ёмкость должна выдержать.
guest: Ольга , 05.09.2012 20:37
спасибо за ответ, а при повышении кислотности он не выпадет опять в осадок? почему же в методиках об этом ничего не говорят?
vtosha, 06.09.2012 15:05
Не должен. Впрочем, попробуйте и проверьте. Не говорят, наверное, потому, что считают это тайной гильдииsmile.gif. Некоторая такая мелочь, которую считают само собой разумеющейся (типа какой буфер для фореза брать). Лет пятьдесят назад, наверное, писали, когда составы сред подбирали.
guest: Ольга , 06.09.2012 20:08
попробовала сегодня так сделать в 1 мл растворила 30 мг щелочи и 10мг казеина, держала на водяной бане, немного начал растворяться, получился гель, а когда стала доводить буфером стал плавать хлопьями frown.gif
vtosha, 06.09.2012 20:31
Не очень понятно. Вы одновременно щёлочь и казеин растворяли? Попробуйте по-другому. Вначале сделайте раствор щёлочи (например, 2N), а потом капните каплю (50 мкл) на сухой казеин. Подождите, пока растворится до прозрачности, а потом уже доводите буфером.
guest: Ольга , 09.09.2012 13:30
Нашла другую научную работу оказывается они используют не чистый казеин, а казеинат натрия, но почему-то другие умалчивают этот момент в своих методиках...
vtosha, 09.09.2012 18:54
Кстати, а вы не слишком слабую щёлочь взяли? Если это NaOH, то может так быть, что 30 мг/мл маловато, лучше взять 80. Только капать как можно меньше.
guest: ольга , 10.09.2012 15:19
спасибо.. попробую
guest: 123 , 13.06.2022 08:03
Saxon Mullins 123VEGA says she once had PRAGMATIC PLAY romantic dreams of what her 'first time' would ICONIC GAMING be like. In none was หวยปิงปอง she paralysed by fear in a Sydney ปั่นสล็อต alleyway, aged 18, with a 123GOAL man she had met only minutes earlier. Ms 88KTC Mullins has always maintained FC SLOT this incident - in 2013 - was rape. It spurred AMB CASINO her to push for legal 11HILO reform in Australia, after a long court battle ended with a judge finding the man involved did not realise she hadn't consented to sex.
Это — лёгкая версия форума. Чтобы попасть на полную, щелкните здесь.
Invision Power Board © 2001-2024 Invision Power Services, Inc.