 
| |
[ Вход | Регистрация ]
|
удаление детергентов?
мыша, 19.11.2003 10:41
Достаточно ли для этого диализа? В частоности для удаления SDS и твин-80 из белковых растворов.
Anonymous, 19.11.2003 12:12
Диализа абсолютно не достаточно.
Необходимо либо прогонять белок через сорбент Detergent-Free.
Более дешевый способ посадить на ионообменную либо адсорбционную матрицу. Затем промыть буфером ионным детергентом а затем минимум 20 колоночными объемами буфера без детергента. Затем сбивка.
В любом случае гарантии, что Вы освободитесь от детергента (особенно SDS или Tween) нет.
Необходимо либо прогонять белок через сорбент Detergent-Free.
Более дешевый способ посадить на ионообменную либо адсорбционную матрицу. Затем промыть буфером ионным детергентом а затем минимум 20 колоночными объемами буфера без детергента. Затем сбивка.
В любом случае гарантии, что Вы освободитесь от детергента (особенно SDS или Tween) нет.
Anonymous, 19.11.2003 13:08
Вопрос неясен. До какой степени и с какой целью надо удалять детергенты? Понимает ли мыша, что белок после этого будет скорее всего денатурирован, т.е. разница между нативным и после SDS будет примерно такая же, как и с яичным белком до и после того как его сварили?
Anonymous, 19.11.2003 13:24
Гарантии дает только Ллойд, и тот в твердой валюте.
SDS более или менее удаляется диализом в низкоионном буфере, при чем, если позволяют условия, повышенная температура и добавление всяких DMSO, глицерина и метанола приветствуется.
А вот с твином дела существенно хуже, тут кроме всяких спиртовых или ацетоновых переосаждений и хроматографии на гидрофобных сорбентах вряд ли что поможет да и это помогает очень хреново, можно еще попробовать диализ против 8М мочевины если вам это позволяют ваши условия.И ионообменную хроматографию белок на сорбенте твин в проскоке(не вздумайте так эксперемнтировать с SDS на анионообменнеке такое получится "пориво", мало не покажется).
SDS более или менее удаляется диализом в низкоионном буфере, при чем, если позволяют условия, повышенная температура и добавление всяких DMSO, глицерина и метанола приветствуется.
А вот с твином дела существенно хуже, тут кроме всяких спиртовых или ацетоновых переосаждений и хроматографии на гидрофобных сорбентах вряд ли что поможет да и это помогает очень хреново, можно еще попробовать диализ против 8М мочевины если вам это позволяют ваши условия.И ионообменную хроматографию белок на сорбенте твин в проскоке(не вздумайте так эксперемнтировать с SDS на анионообменнеке такое получится "пориво", мало не покажется).
мыша, 19.11.2003 14:00
to <рутина>
Цель - использование белка в ИФА. Я подозреваю, что по крайней мере, с твином он на планшет не сядет.
После SDS я догадываюсь, что белок скорее всего денатурируется, а вот насчет твина - скорее нет чем да.
to <ммм>
А что значит "И ионообменную хроматографию белок на сорбенте твин в проскоке"? Белок сядет на ионообменник, а твин уйдет? А белок потом с сорбента снимем или он навечно может остаться (например в осадок выпадет)?
Цель - использование белка в ИФА. Я подозреваю, что по крайней мере, с твином он на планшет не сядет.
После SDS я догадываюсь, что белок скорее всего денатурируется, а вот насчет твина - скорее нет чем да.
to <ммм>
А что значит "И ионообменную хроматографию белок на сорбенте твин в проскоке"? Белок сядет на ионообменник, а твин уйдет? А белок потом с сорбента снимем или он навечно может остаться (например в осадок выпадет)?
Павел, 19.11.2003 14:11
мыша, попробуйте для начала высадить сульфатом аммония и осадок промыть спиртом. Потом растворить в нужном буфере. для ИФА - нормально!
Anonymous, 19.11.2003 14:22
Смоется, симоется солью смоется(из соли, кстати, хорошо на плвту садится)
На плату белок наносят в очень низких концентрациях, возможно, простое разведение вам поможет.
Денатурация белка отнюдь не смерть ИФА, пример тому Вестерн.
Идея Павла мне тоже нравится, но концентрация белка должна быть приличной.
На плату белок наносят в очень низких концентрациях, возможно, простое разведение вам поможет.
Денатурация белка отнюдь не смерть ИФА, пример тому Вестерн.
Идея Павла мне тоже нравится, но концентрация белка должна быть приличной.
мыша, 19.11.2003 15:18
to <ммм>
Вот еще что подумала: я ведь получаю его в основном ионообменной хрматографией, только элюцию провожу буфером с твином. Может есть смысл просто элюцию без твина делать и все?
Вот еще что подумала: я ведь получаю его в основном ионообменной хрматографией, только элюцию провожу буфером с твином. Может есть смысл просто элюцию без твина делать и все?
Anonymous, 19.11.2003 15:44
Лучше промыть буфером в котором наносите на и/о колонку с твином, а смыть уже без твина, вот и решение всех ваших проблем, если конечно при смывании белок не повалится в осадок.
Хорошо думаешь, мышка.
Хорошо думаешь, мышка.
AVS, 19.11.2003 15:49
Детергенты обычно мешают ИФА (особенно SDS), хотя раз на раз не приходится. Последняя ваша мысль наиболее здравая - попробуйте обойтись без детергентов на последней стадии очистки.
AD, 19.11.2003 19:13
0,05% Твин 20 мне никогда не мешал ни на ИФА, ни на Вестерне.
Anonymous, 19.11.2003 19:19
Posmotrite v PubMed statti Rigaud et al. U nego celyj cykl publikacij byl po etomu povodu, v osnovnom eto dlja membrane proteins reconstitution i kristallizacii. Esli zhe eto chego poprosche to ne stoit paritsja voobsche.
мыша, 20.11.2003 06:22
>0,05% Твин 20 мне никогда не мешал ни на ИФА, ни на Вестерне.
Ну у меня, положим, 0,5-1%. И потом, он полезен уже при иммунных реакциях, а на этапе сорбции планшета, думаю, что вреден очень будет.
Ну у меня, положим, 0,5-1%. И потом, он полезен уже при иммунных реакциях, а на этапе сорбции планшета, думаю, что вреден очень будет.
AD, 20.11.2003 11:04
Автор - мыша:
>0,05% Твин 20 мне никогда не мешал ни на ИФА, ни на Вестерне.
Ну у меня, положим, 0,5-1%. И потом, он полезен уже при иммунных реакциях, а на этапе сорбции планшета, думаю, что вреден очень будет.
Откуда возникла необходимость использования детергента?>0,05% Твин 20 мне никогда не мешал ни на ИФА, ни на Вестерне.
Ну у меня, положим, 0,5-1%. И потом, он полезен уже при иммунных реакциях, а на этапе сорбции планшета, думаю, что вреден очень будет.
Как выбрали концентрацию? Можно ли ее снизить?
arita, 20.11.2003 13:21
У меня есть параллельный вопрос: а глицерин не мешает белку на плату садиться, для ИФА(само собой при нанесении белок был сильно разведен)?
Спасибо.
Спасибо.
Aronich, 21.11.2003 10:14
Biobeads, Biorad. (sorbing detergent on
hydrophobic matrix with the low exclusion limit)
Fast, easy, small volumes and concentrations.
You 'd probably need
some detergent to be left in solution.
Pharmacia sales person advised on octyl glucoside
or even SDS (!!) for sample preparation, all the matter of
concentration.
hydrophobic matrix with the low exclusion limit)
Fast, easy, small volumes and concentrations.
You 'd probably need
some detergent to be left in solution.
Pharmacia sales person advised on octyl glucoside
or even SDS (!!) for sample preparation, all the matter of
concentration.
мыша, 25.11.2003 06:11
90% белка засело в колонке. Хорошо еще не напрочь - раствором твина смылось, но проблема осталась.
merry89, 01.05.2022 11:15
nigoal123, 04.05.2022 09:48
Along with a title that attention and indicates a well-written abstract is essential. The abstract is what readers and other researchers will look at first to determine
if your article is worth reading. It is worth spending time on a succinct and relevant abstract that will clarify exactly what you are arguing or proposing.
if your article is worth reading. It is worth spending time on a succinct and relevant abstract that will clarify exactly what you are arguing or proposing.
nigoal123, 05.05.2022 09:22
Families these days are spending less and less time at home during the working week. School commitments work meetings and extra curricular activities mean that time
The final paragraph uses quotations from an expert to add credibility to the argument. are prepared to put in the effort to prepare fresh, healthy meals.
The final paragraph uses quotations from an expert to add credibility to the argument. are prepared to put in the effort to prepare fresh, healthy meals.
nigoal123, 12.05.2022 12:10
An article is a piece of informative content that people research and distribute to readers. You can write articles for to break things down into their different mediums such as newspapers
most often write and use articles as part of their content marketing strategy. This provides readers and potential customers with that’s valuable and helpful.
most often write and use articles as part of their content marketing strategy. This provides readers and potential customers with that’s valuable and helpful.
abdukhan, 12.05.2022 13:17
Это — лёгкая версия форума. Чтобы попасть на полную, щелкните здесь.