Новый протокол "Окрашивание белковых гелей Coomassie brilliant blue G-250" от Инны Кригер (kriginkri@mail.ru). Это модифицированный метод из статьи Reisner A.H., Nemes P., Bucholtz C. 1975. Anal.Biochem. 99:474-476, использующийся в Институте белка РАН. На сколько я помню по собственному опыту чувствительность чуть ниже, чем при использовании кумасси R-250, но метод (i) очень быстр; (ii) гель именно "проявляется", то есть читать можно в процессе окрашивания, а не отмывки.
 
| |
[ Вход | Регистрация ]
|
Окрашивание белковых гелей Кумасси G-250
Redactor, 10.04.2002 09:10
tovaroved, 20.12.2010 17:59
Метод простой и быстрый (времена указаны для геля толщиной 0,75 мм).
Про чувствительность: видна полоса 10нг/трек БСА.
Растворы:
окрашивающий раствор: 0,1-0,2% G250, Perchloric acid 4%, Ethanol 10%
Приготовление: к красителю добавить спирт и горячую воду, мешать пока не добьетесь полного растворения. И только тогда ввести кислоту. Если растворять иначе, то краситель выпадет в осадок через 1-2 недели. А так он стоит по полгода и продолжает замечательно красить.
п.1 Наглядно видна фиксация по уменьшению размера геля, он сжимается, т.к. спирт вытягивает воду, фиксация занимает 3-5 мин.
п.2 Инкубация в свежем красителе 3 мин. По мере старения краситель переходит из коричневого в зеленовато-красный цвет, плохая окраска видна по блеклым полосам в геле. Мне окрашивающего раствора хватает более чем на 40 гелей.
п.3 Отмываю просто кипятком, хватает сполоснуть 3 раза по 5-8 мин с перемешиванием на шейкере.
Про чувствительность: видна полоса 10нг/трек БСА.
Растворы:
окрашивающий раствор: 0,1-0,2% G250, Perchloric acid 4%, Ethanol 10%
Приготовление: к красителю добавить спирт и горячую воду, мешать пока не добьетесь полного растворения. И только тогда ввести кислоту. Если растворять иначе, то краситель выпадет в осадок через 1-2 недели. А так он стоит по полгода и продолжает замечательно красить.
п.1 Наглядно видна фиксация по уменьшению размера геля, он сжимается, т.к. спирт вытягивает воду, фиксация занимает 3-5 мин.
п.2 Инкубация в свежем красителе 3 мин. По мере старения краситель переходит из коричневого в зеленовато-красный цвет, плохая окраска видна по блеклым полосам в геле. Мне окрашивающего раствора хватает более чем на 40 гелей.
п.3 Отмываю просто кипятком, хватает сполоснуть 3 раза по 5-8 мин с перемешиванием на шейкере.
papa Karlo, 20.12.2010 20:30
Явно видно что автор из Пущино... :-)) Жутко економный.
И опыта работы в ГЛП:ГМП не имеет..
И совсем не знает что БСА - имеет аномально высокое связывание с кумасси....
И еще.... вообщем молчу.... пусть ТомI отдувается.
И опыта работы в ГЛП:ГМП не имеет..
И совсем не знает что БСА - имеет аномально высокое связывание с кумасси....
И еще.... вообщем молчу.... пусть ТомI отдувается.
Это — лёгкая версия форума. Чтобы попасть на полную, щелкните здесь.