Если Вы работаете с клетками человеческого
или мышиного происхождения у которих высокий (больше 60%) уровень
трансфекции, пожалуйста скажите название и где можно их достать.

Спасибо, Ина
Белок, которым трансфецирую, буду использовать как "кручок" для выуживания неизвестних мне белков. Так-как их нужно набрать в достаточном количестве, желателен высокий уровень ехпрессии после трансфекции. Я даже подумивау попробывать сделать stable clone, хотя не пробывал этого еше.
С другой сторони, мои "белок-кручок" - токсичен для клетки. Поетому нужно чтоби он так встроился в геном, чтоби уровен ехпрессии был низким.

А вы 293 каким способом трансфецировали? Какои процент клеток трансфектнулся?

Есть сублиния 293Т или даже 293ФТ(Инвитроген) быстрорастущие, растут как из пулемёта, синтез белка высокий, еффективность трансфекции очень высокая, близка к 100% Трансфецируем Липофектамином2000. Но у них кажется устойчивость к г418 так что по нему уже не отберёшь стабильные линии, если ваш конструкт не предусматривает другои антибиотик, надо глянуть..

ну смотря как и чем вы трансфецируете, есть easy-to-transfect cell lines and hard-to-transfect cell lines, обычно primary cells плохо трансфецируются, эпителиальные и нервные плохо трансфецируются
ну липофектамином и прочими похожими соединениями легко трансфецируются cos-1, cos-7, hek 293, hela, cho, vero, NIH/3T3 ну и другие

Ромкину Г.:

Если речь идёт о <transient transfection>, с плазмидой например, то електропорацией многие клетки очень хорошо трансфектируются, метод не чувствителен к типу клеток. Но нужно делать с умом, выбрать режим, а не бездумно переносить параметры, оптимальные для одного типа, на другой (стандартная ошибка биологов; я - биофозик ;-).

Это конечно всё верно для плазмид, тут преимусчествoперед липофекторами - отсутствие селективности, как я сказал, трансфецируются ЛЮБЫЕ клетки.

Недостатки:
Нужна хорошая установка, не <Biorad>овское дерьмо, а скажем, <BTX-820>. напишите е-маил, я подскажу:

russomaha@yahoo.com

Если вирусная трансфекция - тут я не спец.

Russomaha

Ежели токсичен, то либо попытался бы спреципитировать его из транзиентных трансфектантов до того, как они помрут окончательно, либо делал бы стабильных трансфектантов с индуцированной экспрессией.
Для стабильных эффективность трансфекции по барабану, если у Вас есть хороший метод селекции.