Особенно, если большая плазмида, то перемешать надо тщательно, но сильно не трясти.
п. 4.
Должна получиться творожная каша, но немного не такая, как получается, когда лизируешь по Qiagen: более мелкие хлопья.
п. 5.
Я кручу в 50ml "фальконах". После открутки возможны два варианта - или очень ясный супер и твердый белый осадок, тогда всё OK. Не знаю, почему, но так иногда бывает, что осадок и супер не разделятся, это плохо прошедший лизис; тогда есть шанс отделить немого супера, но лучше все выкинуть :(( .
п. 8.
Это самый дурацкий шаг, его надо делать тщательно. Осадок растворяется очень плохо, но это нормально. Я наливаю воды, привинчиваю пробирку к "Вортексу" и трясу на максимальной скорости.
п. 13-16.
На этой стадии теряется до 50% DNA, но всё равно много остаётся.