MolBiol.ru > Методы > ДНК из геля > С помощью центрифугирования | |
|
ГЛАВНАЯ ·
ПРОЕКТ ·
СПРАВОЧНИК ·
МЕТОДЫ ·
РАСТВОРЫ ·
РАСЧЁТЫ ·
ЛИТЕРАТУРА ·
ЗАДАЧИ ·
ФИРМЫ ·
Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
|
Выделение ДНК из агарозного геля с помощью центрифугирования
Для простых применений не требующих количественной элюции, DNA не слишком большого размера (<5kbp) можно выделить из агарозы с эффективностью >50% с помощью spin-центрифугирования через любой относительно крупнопористый фильтр. Можно использовать коммерческие spin-колонки, можно приготовить колонку самому (в качестве фильтра использовать GF/-, Whatman 3MM, типчик с аэрозольным фильтром и т.п).
Комментарии Общие Дополнение от Барановой Анчи (ИОГЕН РАН). Для простых применений (а также не только для самых простых) ДНК из геля можно выделить без всяких приспособлений, в том числе без мембраны. P.S. Для рестрикции лучше все-таки ДНК переосадить. Дополнения, комментарии, вопросы distemper /26.12.2005 06:49/
Если разгоняли в ТАЕ (лучше 0.5Х) то можно и в сиквенс. Тоже неоднократно проверено. МарМышка /26.12.2005 12:12/
А в чем разница: делать форез на ТАЕ или ТВЕ? Urrу /26.12.2005 17:22/
(МарМышка @ 26.12.2005 09:12) в трис-ацетате как правило лучше разрешение при разделении фрагментов от 2 тпн и длинее по сравнению с трис-боратом, а так же скорость движения таких фрагментов выше, зато буферная ёмкость по сравнению с трис-боратом у него ниже - истощается если гнать долго. Кроме того ТВЕ более эффективно разделяет короткие фрагменты - менее 2 тпн - и особенно от 300 пн и короче в концентрированной агарозе - 2% и более... Гость /21.02.2008 19:34/
как думаете, можно ли этот метод применить для выделения белкового комплекса из агарозы? Я делаю в настоящее время путем электроэллюции в диализный мешок, но проблема - большие потери комплекса, по дороге он еще и разваливается часто, в общем, есть ли у кого-то встречный опыт? Буду благодарна за совет. Virus-71 /20.06.2008 09:08/
Подскажите пожалуйста методику переосаждения ДНК после выделения из геля. Guest /20.06.2008 10:35/
1/10 объема 3М ацетета (Na,K без разницы) и 1V изопропанола, морозите минут 30, цнтрифугируете, омываете осадок 70% этанолом и вуаля guest: Andrei /20.06.2008 12:41/
Замораживаем пробирку с гелем в жидком азоте, извлекаем замороженный гель, заворачиваем в парафильм, прижимаем сверху куском стекла, нееежно давим теплым пальцем попутно отбирая пипеткой вытекающую жидкость. Останется только переосадить. |
Смотри также: /ссылки на сетевые ресурсы/
|
ГЛАВНАЯ ·
ПРОЕКТ ·
СПРАВОЧНИК ·
МЕТОДЫ ·
РАСТВОРЫ ·
РАСЧЁТЫ ·
ЛИТЕРАТУРА ·
ЗАДАЧИ ·
ФИРМЫ ·
Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
|