MolBiol.ru > Методы > Real-time PCR > Выбор методики | |
|
ГЛАВНАЯ ·
ПРОЕКТ ·
СПРАВОЧНИК ·
МЕТОДЫ ·
РАСТВОРЫ ·
РАСЧЁТЫ ·
ЛИТЕРАТУРА ·
ЗАДАЧИ ·
ФИРМЫ ·
Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
|
3. Какую методику выбрать?
В таблице, приведенной ниже, сравниваются методики SYBR Green и TaqMan. Технологии Molecular beacons и LightCycler стоят ощутимо дороже, и их осмысленно применять лишь в том случае, когда требуется крайне специфичная детекция лишь одного из образующихся PCR-продуктов (например, при анализе SNP).
Итак, SYBR Green - методика первого выбора для экспериментов, в которых требуется определение количества одного продукта. Переходить от SYBR Green к TaqMan имеет смысл в случае, если: Обычно SYBR Green хорошо работает примерно до C(T) = 35-37, затем точность начинает падать. Диапазон достоверности результатов легко проверить для каждой конкретной пары праймеров, проведя несколько независимых real-time PCR. Сразу же начинать с TaqMan рекомендуется, когда: TaqMan необходим также, когда требуется проконтролировать в одной пробирке образование нескольких PCR-продуктов, как с одной пары праймеров, так и с нескольких. Однако нужно иметь в виду, что увеличение количества реакций в одной пробирке значительно усложняет оптимизацию, поэтому без необходимости это делать не рекомендуется. Упомянем два случая, в которых представляется осмысленным проведение 2-х реакций в одной пробирке: Контроль больше двух продуктов в одной пробирке, скорее всего, потребует огромных усилий по наладке эксперимента, и прибегать к таким схемам рекомендуется лишь в исключительных случаях. Напомним также, что не каждая real-time PCR машина способна детектировать флуоресценцию больше, чем в одном канале. Двухканальные машины достаточно распространены, а вот четырехканальная аппаратура в настоящее время лишь начинает появляться на рынке.
Дополнения, комментарии, вопросы Гость /07.06.2005 08:24/
Уважаемый автор. Людям знающим на Вашем сайте делать нечего: они и так все знают. А вот те, кто ходит к Вам за информацией, хотели бы знать, что означают некоторые сокращения. Например, что это значит: C(T) = 35-37. Гость /27.10.2005 10:09/
Уважаемый Автор! Спасибо за информацию по методам ПЦР. Ещё хотельсь бы знать(я занимаюсь поставками амплификаторов): для чего используются такие методы, как FAM, JOE, HEX, TET, VIC, Cy3, ROX, Texas Red? Хотя бы кратенько!!! watchesonline89 /17.12.2022 10:11/
|
|
ГЛАВНАЯ ·
ПРОЕКТ ·
СПРАВОЧНИК ·
МЕТОДЫ ·
РАСТВОРЫ ·
РАСЧЁТЫ ·
ЛИТЕРАТУРА ·
ЗАДАЧИ ·
ФИРМЫ ·
Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
|