Главная страница MolBiol.ru > Методы > Геномная ДНК > Полевой материал Rambler's Top100
ГЛАВНАЯ · ПРОЕКТ · СПРАВОЧНИК · МЕТОДЫ · РАСТВОРЫ · РАСЧЁТЫ · ЛИТЕРАТУРА · ЗАДАЧИ · FULL TEXT · ОРГ.ВОПРОСЫ · WEB
ФИРМЫ · КАРТА САЙТА · COFFEE BREAK · КАРТИНКИ · РАБОТЫ И УСЛУГИ · БИРЖА ТРУДА · ФОРУМЫ · · Zbio-wiki

Сбор полевого материала для ПЦР

Владимир А. Чистяков
/Ростов-на-Дону/ rw@azovfish.ru

Тема обсуждалась на Форуме.
  1. порезать образец;
  2. поместить в пластиковую пробирку;
  3. залить пробирку до верха 96% этанолом;

  4. через сутки-трое:
  5. первую порцию этанола слить и перезалить новым 96% этанолом;
  6. внести в пробирку сухую EDTA на кончике скальпеля.


MolBiol.ru: http://molbiol.ru
e-mail: redactor@molbiol.ru
просмотров: 10985


    Комментарии

    Общие

  • Качество фиксации. Более трех лет занимаюсь сбором коллекции ДНК-содержащих образцов осетровых рыб для Государственной генетической коллекции гокомрыболовства РФ, собрано более 1000 образцов для ПЦР и RAPiD, на качество еще никто не жаловался. ДНК нормально выделяется как фенол/хлороформным методом, так и солевой экстракцией.
  • Посуда. Лучшая посуда - пластиковые пробирки с герметически завинчивающимися крышками, с "юбкой", которые могут стоять на плоскости, объемом 5 - 10ml, мы покупаем их в фирме Хеликон (Москва).
  • Маркировка. Помимо надписей на пробирке, которые лучше делать простым мягким карандашом, номер и описание пробы нужно написать на маленькой бумажке и положить в пробирку. В полевых условиях это иногда выручает.
  • Меры для предохранения от загрязнения одних проб следами других. В море обычно проблем с водой не бывает и инструменты можно мыть, а затем протирать спиртом, но где-нибудь в пустыне наверное стоит иметь запас одноразовых пинцетов и скальпелей.
  • Этанол. Самые большие проблемы при таком методе фиксации - выпивание части этанола с последующим разбавлением и связанная с ней проблема недолива. Если вы обладаете достаточным авторитетом среди участников экспедиции и примкнувших к ним лиц (егерей, пограничников, проводников, моряков и др.) - фиксируйте чистым 96%этанолом, если нет - раствором фурацилина в этаноле (концентрация не имеет значения, главное устрашающая окраска).


  • По пунктам

    п. 1.

  • Важен не абсолютный размер(масса), а отношение объема образца к поверхности. Чем быстрее этанол пропитает образец, тем качественнее пройдет фиксация. Наш опыт показывает, что оптимальная толщина образца около 1mm.
  • п. 2.

  • Соотношение поверхность/объем фиксируемого образца должно быть максимальным. Отношение образец/этанол должно быть не более 1/5
  • п. 3.

  • Пузырьков воздуха оставаться не должно.
  • п. 4,5.

  • Это делается для удаления воды и уменьшения концентрации липидов, субстрата для перекисного окисления.
    • Дополнения, комментарии, вопросы





         


Смотри также:
/ссылки на сетевые ресурсы/


Дата последней модификации: 30/07/13

ГЛАВНАЯ · ПРОЕКТ · СПРАВОЧНИК · МЕТОДЫ · РАСТВОРЫ · РАСЧЁТЫ · ЛИТЕРАТУРА · ЗАДАЧИ · FULL TEXT · ОРГ.ВОПРОСЫ · WEB
ФИРМЫ · КАРТА САЙТА · COFFEE BREAK · КАРТИНКИ · РАБОТЫ И УСЛУГИ · БИРЖА ТРУДА · ФОРУМЫ · · Zbio-wiki

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

molbiol.ru  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама

molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов   Rambler