Главная страница MolBiol.ru > Методы > RNA > Выделение RNA из мух (Протеиназа К) Rambler's Top100
ГЛАВНАЯ · ПРОЕКТ · СПРАВОЧНИК · МЕТОДЫ · РАСТВОРЫ · РАСЧЁТЫ · ЛИТЕРАТУРА · ЗАДАЧИ · FULL TEXT · ОРГ.ВОПРОСЫ · WEB
ФИРМЫ · КАРТА САЙТА · COFFEE BREAK · КАРТИНКИ · РАБОТЫ И УСЛУГИ · БИРЖА ТРУДА · ФОРУМЫ · · Zbio-wiki

Выделение RNA из мух (с Протеиназой К)

Метод для выделения РНК прочно связанной с белками.
Подготовила Оксана Кравчук, Институт Биологии гена.
  1. гомогенизировать 100 мух в 2ml DB;
  2. инкубировать 37oС, 20';
  3. очистка фенол-хлороформ, хлороформ;
  4. добавить
  5. 50µl 8 М LiCl,
    3V EtOH; осадить;

  6. растворить осадок в 200µl H2O и осадить равным объемом 4M LiCl при 4oС в течение ночи;
  7. растворить осадок в 200µl H2O и добавить 3 объема этанола (так хранить);
  8. если нужно осадить, то добавить 20µl 3М AcNa, pH 5.1


MolBiol.ru: http://molbiol.ru
e-mail: redactor@molbiol.ru
просмотров: 11695

    Растворы

    DB (digestion buffer)

    (хранить при 4oС):

    Конц.Сток50ml100ml
    NaCl100mM1M5.0ml10.0ml
    TrisCl, pH 7.050mM1M2.5ml5.0ml
    EDTA20mM0.5M2.0ml4.0ml
    SDS1%10%5.0ml10.0ml
    Proteinase K*50µg/ml20µg/µl125µl250µl
    H2O mQ35.5ml71ml

    * Proteinase K добавляется непосредственно перед применением.



    Комментарии

    Общие

  • Преимущество метода в том, что на начальных стадиях выделения не используется фенол, и поэтому не теряется РНК, прочно связанная с белком.
  • Протокол взят из статьи: Danilevskaya ON, Traverse KL, Hogan NC, DeBaryshe PG, Pardue ML. The two Drosophila telomeric transposable elements have very different patterns of transcription. Mol Cell Biol. 1999 19(1):873-81.


  • По пунктам

    п. 3.

  • Также, как для ДНК. Можно использовать как нейтральный, так и кислый фенол.

    Дополнения, комментарии, вопросы





       


Смотри также:
/ссылки на сетевые ресурсы/


Дата последней модификации: 30/07/13

ГЛАВНАЯ · ПРОЕКТ · СПРАВОЧНИК · МЕТОДЫ · РАСТВОРЫ · РАСЧЁТЫ · ЛИТЕРАТУРА · ЗАДАЧИ · FULL TEXT · ОРГ.ВОПРОСЫ · WEB
ФИРМЫ · КАРТА САЙТА · COFFEE BREAK · КАРТИНКИ · РАБОТЫ И УСЛУГИ · БИРЖА ТРУДА · ФОРУМЫ · · Zbio-wiki

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

molbiol.ru  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама

molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов   Rambler