MolBiol.ru > Методы > Белки > Окрашивание коллоидным Кумасси G250 | |
|
ГЛАВНАЯ ·
ПРОЕКТ ·
СПРАВОЧНИК ·
МЕТОДЫ ·
РАСТВОРЫ ·
РАСЧЁТЫ ·
ЛИТЕРАТУРА ·
ЗАДАЧИ ·
ФИРМЫ ·
Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
|
Окрашивание белковых гелей коллоидным Кумасси G250
Отмывка от SDS Окрашивание Отмывка от несвязавшегося красителя.
п. 1. п. 2. п. 3. Дополнения, комментарии, вопросы yaden /13.06.2005 12:38/
Здесь лежит статья с усовершенствованием этого метода http://newjournal.kcsnet.or.kr/main/j_sear...tm?code=B021105 ( http://newjournal.kcsnet.or.kr/main/j_search/j_download.htm?code=B021105 ) Mac-1 /17.06.2005 22:03/
Описаный в статье реагент продает Pierce как "Gel code Blue". Коллоидная окраска хорошо работает только на тонких и сверхтонких гелях (0.5 mm и тоньше, типа PhastGel), для 0.75-1 мм лучше применять краску такого состава: 5 мг Кумасси R-250 10 мг Кумасси G-250 10 мг Amido black ------------------ 100 ml 10% Уксусной кислоты Гель разбухает при окраске, что обеспечивает лучшую диффузию краски внутрь, при отмывке в 5% уксусной/20% метанол он возвращается к обычному размеру. гость: г /19.06.2005 15:30/
Стандартный способ с 10-20% сульфатом аммония у меня работал нестабильно. Я титровал разок БСА, было видно 5 нг, как, примерно, видно 50нг при обычном R-250. Обычно использовал коллоидное Кум.после окрашивания стандартным способом с R-250 для усиления окраски слабых полос, но красить надо сутки, помогало. yaden /01.11.2005 15:41/
Самая свежая статья по этому методу: G.Candiano et al. Blue silver: A very sensitive colloidal Coomassie G-250 staining for proteome analysis. Electrophoresis 2004, 25, 1327–1333. http://www3.interscience.wiley.com/cgi-bin...565269/ABSTRACT ( http://www3.interscience.wiley.com/cgi-bin/abstract/108565269/ABSTRACT ) Делаю как в статье, только метанол заменяю на этанол - работает хорошо. Но полгода не хранится... проверено. Гость /11.01.2006 01:58/
Это - калька SympleBlue Microwave Protocol from Invotrogen (1,0 и 1,5мм минигели) © Пологаю, для него подойдет раствор любого коллоидного кумасси - я делал это с био-радовским 161-0786. Итак: 1. Поместить гель в 100мл ультра-чистой воды и греть в микроволновке при 950-1100Вт ----- 1 минута. 2. Покачать гель на орбитальном шейкере и слить воду ----- 1 минута. 3. Дважды повторить этапы 1 и 2 ----- каждого по 1 минуте. 4. Добавить 20-30мл коллоидного кумасси и погреть в микроволновке при 950-1100Вт ----- 45-60 секунд. 5. Покачать на орбитальном шейкере. Слить краску ----- 5-10 минут. 6. Мыть гель покачиванием в 100мл ультрачистой воды ----- 10 минут. 7. Влить в воду 20мл 20%NaCl и качать ----- 5-10 минут. (8. При желании повторить этап 6, чтобы убрать фон ----- 1 час). Еще отсебятина: жидкости буквально кипят, но 3%ПААГ или градиентный 3-8%ПААГ остаются целыми, чуствительность неплохая - я красил после трансфера/20 часов и, к своему удивлению, что не все перенеслось. Надеюсь, это те 5нг, про которые пасали на фирме. А фон белый-белый. plotter /11.12.2008 19:11/
У меня вопрос, а кто пробовал растворит обычный (не пудра-образный) сульфат аммония в фосфорной кислоте? Сколько это может времени занять? Я на шейкер поставил, уже час плюхается, но эффекта не заметно... Пробую наваять plotter /12.12.2008 12:37/
Народ, коллоидом никто не красит чтоли? plotter /22.07.2010 16:08/
Написано, что после отмывки нельзя долго хранить. Некоторые гели месяцами валяются забытыми в холодильнике, под сантиметровым слоем обычного дистиллята. И все полосочки видно как на свежепрогнанном. guest: ммм /22.07.2010 20:33/
-Народ, коллоидом никто не красит чтоли? Я другим протоколом красил там ТХУК и сульфата и фосфорки нет. --под сантиметровым слоем обычного дистиллята. Это зря лучше все же в уксусе низкомолекулярные белочки размываются в водице, а то и совсем из геля выходють. -Написано, что после отмывки нельзя долго хранить. Может коллоидный кумаси легко отваливается от геля, не знаю. plotter /11.08.2010 18:23/
Это зря лучше все же в уксусе низкомолекулярные белочки размываются в водице, а то и совсем из геля выходють ~12.5kDa. Сидят как вкопанные.watchesbiz /19.12.2021 17:32/
|
Смотри также: /ссылки на сетевые ресурсы/
|
ГЛАВНАЯ ·
ПРОЕКТ ·
СПРАВОЧНИК ·
МЕТОДЫ ·
РАСТВОРЫ ·
РАСЧЁТЫ ·
ЛИТЕРАТУРА ·
ЗАДАЧИ ·
ФИРМЫ ·
Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
|