Фиксация и заливка в парафин (дрозофила)
Фиксация в Корнуа
- на предметном стекле с помощью скальпеля отрезать у мух голову и грудь;
- фиксировать в "Корнуа" 2h;
- отмывать в 80% EtOH ON;
- фиксированные объекты можно хранить в течение 1-2 месяцев при -20oС в 80% EtOH;
Проводка по спиртам и заключение в парафин
- в день заливки в парафин с утра поставить прогреваться все парафины и "кашу" в термостате (56oС);
- провести:
EtOH (80%), NT => 30'
EtOH (96%), NT => 30'
EtOH (100%) (I), NT => 30'
EtOH (100%) (II), NT => 30'
EtOH (100%):ксилол (1:1), NT => 15'
ксилол (I), NT => 20'
ксилол (II), NT => 20'
ксилол:парафин (1:1), 56oC => 40'
парафин (I), 56oC => 40'
парафин (II), 56oC => 40';
Заливка в парафин
- прогреть (в течение 20-30') часовое стекло и подложку бинокуляра в термостате (56oС);
- перед заливкой парафина смазать часовое стекло глицерином;
- "заливочный" (чистый) парафин => в часовое стекло;
- разогретой пипеткой перенести мух в "заливочный" парафин;
- ориентировать объект под бинокуляром с помощью препаровальной иглы, нагретой на спиртовке;
- опустить стекло в холодную воду, подержав его на поверхности 30-40'';
- вырезать при помощи разогретого скальпеля "минимальные" блоки с объектом, наклеить на кубики.
Приготовление 100% EtOH
- высушить в термостате (65oС, 1-2 суток) медный купорос до почти белого цвета;
- засыпать его на 1/4 в емкость, в которой будет находиться 100% EtOH;
- добавить 96% спирт, интенсивно встряхивать и оставить на 1-2 суток (CuSO4 "заберёт" воду из спирта).
Комментарии
По пунктам
п. 1-4.
- Фиксация и отмывка проводятся либо в небольших бюксиках либо в пенициллиновых пузырьках.
п. 5.
- Ксилольная "каша" (ксилол:парафин (1:1)) должна быть жидкой при 47oС; если расплавится не весь парафин, добавить немного ксилола.
п. 6.
- С помощью пипетки (лучше стеклянной) объекты переносятся в фарфоровые бюксики, в которых и проводятся по "каше" и парафинам I и II.
- Парафин I и II служат для пропитки объектов парафином и отмывки их от их ксилола.
п.9.
- Для заливки используется чистый парафин, который хранится в отдельном фарфоровом стакане
п.13.
- Залитые в парафин объекты можно хранить при 4oС: для иммуногистохимии - в течение месяца; для гистологии - 3-4 месяца.
Дополнения, комментарии, вопросы
Гость /20.07.2006 15:08/
Плохие же вы гистологи! А фамилия автора фиксатора - КАРНУА.
|
Смотри также:
/ссылки на сетевые ресурсы/
|
MolBiol.ru >
Методы >
Иммуногисто.. > Приготовление срезов тканей
Zbio-wiki
Дополнить